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RESUMEN 

 

SECUENCIACION DE LA MOMIA TRIDACTILA DE 60 cm VICTORIA

LABORATORIO CEN4GEN-ABRAXAS

CANADA

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Abraxas Biosystems realizó una amplia gama de análisis bioinformáticos y genómicos con objetivo de identificar el posible origen biológico y la ascendencia de las muestras proporcionadas por Gaia y Tercer Milenio.

 

El ADN analizado se secuencio en los laboratorios CEN4GEN. Después del diseño de un protocolo meticulosamente personalizado para maximizar la tasa de éxito del ADN antiguo con la extracción, secuenciación (con CEN4GEN Labs) y análisis bioinformático de las muestras.

 

ADN Y ANÁLISIS DE FILTRADO ITERATIVO Para la detección de otros organismos en muestras 0002 y 0004 antiguas que corresponden a huesos y tejidos de Victoria se realizo un análisis de ADN genómico llamado D genómico (que ha sido aislado directamente de celulas o tejidos),(Ondov et al., 2016) que utiliza coincidencias exactas de grupos de fragmentos cortos, k-mers, para el público.

 

Las bases de datos y codificación de estas coincidencias en estructuras se guardan en la base de datos que son rápidas para comparar con las bases de datos públicas de genomas publicados.

 

CLASIFICACIÓN ULTRA INTEGRAL DE TAXONOMIA

 

Las tareas anteriores se realizaron para encontrar la cantidad de lecturas de ADN clasificables. Las muestras con poco mapeo al genoma humano se asemejan a organismos conocidos en la base NCBI.

 

Se busco en muchas gamas taxonómicas y tipos de organismos para proporcionar una clasificación aún más detallada de la secuenciación de ADN. Se trata de encontrar el máximo de organismos conocidos y secuenciados en el planeta tierra para poder comparar las secuencias y asi lograr un amplio espectro de detección y clasificación detallada en cada rango taxonómico posible.

 

Con una estrategia integral y altamente sensible basada en la creación de una nueva base de datos con incluso más entidades, conjuntos de datos de secuencia conocidos en bioinformática como la base de datos NCBI construidos usando algoritmos de eliminación de la compresión y la redundancia.

 

Comparable en sensibilidad a la altamente sensible y conocida base BLAST. Una búsqueda con la base BLAST habría tomado meses ampliando así el poder de búsqueda del croquis y el filtrado iterativo. Esta estrategia se implementó utilizando el software t axmaps v 0.2.1 (Corvelo, Clarke, Robine,& Zody, 2018) y aplicada a un subconjunto del 5% de todas las lecturas sin filtrar sin procesar para las dos muestras: Muestras 1= Ancient0002 y muestra 2= Ancient0003.

 

Los métodos predecían correctamente las proporciones de clasificados y lecturas no clasificadas a medida que las lecturas de las muestras se aproximaban al conjunto completo de lecturas (lo que han requerido docenas de días más para completar).

 

Esta estrategia también permitió comparar si los procesos de superposición y filtrado se comportaron de forma diferente a las lecturas sin filtrar originalmente secuenciados en sus coincidencias con organismos conocidos.

 

RESULTADOS ABRAXAS PARA EL ADN DE VICTORIA

 

Para este análisis se utiliza el software btools. (Https://jgi.doe.gov/data-and-tools/bbtools/) o en su versión 38-25 para realizar el boceto y el filtrado iterativo.

 

Este filtrado también permitió probar la hipótesis de que el ADN secuenciado provino de orígenes microbianos (bacterias, arqueas, virus, hongos o plásmidos).

 

Brevemente la estrategia de una base de datos de todos los modelos bacterianos, arqueales, víricos, fúngicos, plasmídicos, eucariotas (incluidos los humanos) y algunos genomas eucariotas no modelo, así como la parte superior genomas indicados por el método de esbozo disponible en bases de datos públicas hasta la fecha.

 

Estos genomas se utilizaron para construir una base de datos local para comparar las superpuestas lecturas de cada muestra de una manera iterativa que separó las lecturas que tienen al menos una coincidencia exacta de secuencia de tamaño 31 pb a lo largo de su longitud para cada tipo de genomas en comparación.

 

Los conjuntos de genomas utilizados para el filtrado iterativo fueron los siguientes:

1 Las bacterias

2 Virus

3 Plásmidos

4 Fagos

5 Los hongos

6 Plástido

7 Diatomeas

8 Humano

9 Bos Taurus

10 H penzbergensis

11 Phaseolus Vulgaris 12 * Mix2:

Etiqueta para los siguientes genomas:

● Lotus japonicus cloroplasto, genoma completo

● Canis lupus familiaris cOR9S3P familia de receptores olfativos 9 subfamilia S pseudogen (cOR9S3P) en el cromosoma 25

● Vigna radiata mitocondria, genoma completo

● Millettia pinnata cloroplasto, genoma completo

● Curvibacter secuencia de escopeta del genoma completo

● Asinibacterium sp. OR53 scaffold1, secuencia de escopeta de genoma completo Bacillus firmus cepa LK28 32, secuencia de escopeta de genoma completo

● Cloroplasto de Bupleurum falcatum, genoma completo

● Alicycliphilus sp. B1, secuencia de escopeta del genoma completo

● Bacillus litoralis cepa C44 Scaffold1, secuencia de escopeta de genoma completo

●Chryseobacterium takakiae cepa DSM 26898, escopeta de genoma completo secuencia

● Paenibacillus sp. FSL R5-0490

● Bacilo secuencia de escopeta genoma

● Rhodospirillales secuencia

● Bacillus onubensis cepa 10J4 10J4_trimmed_contig_26, genoma completo secuencia de escopeta

● Radyrhizobium secuencia

● Bacilo secuencia de escopeta

13 Vertebrados: Etiqueta para los siguientes genomas:

●Amblyraja-radiata_sAmbRad1_p1.fasta

●bStrHab1_v1.p_Kakapo.fasta

●bTaeGut1_v1.p_ZebraFinch.fasta

● GCA_000978405.1_CapAeg_1.0_genomic_CapraAegagrus.fna

● GCA_002863925.1_EquCab3.0_genomic_Horse.fna

● GCF_000002275.2_Ornithorhynchus_anatinus_5.0.1_genomic.fna

● GCF_000002285.3_CanFam3.1_genomic.fna

● Macaco_GCF_000772875.2_Mmul_8.0.1_genomic.fna

● rGopEvg1_p1_Gopherus_evgoodei_tortuga.fasta 14 protozoos

 

CONCLUSIONES

 

1.-Los resultados muestran una coincidencia de mapeo muy baja con los datos del genoma humano para muestras:

 

VICTORIA                                               Mapeo                                   Mismatech Rate

Ancient 0002 (hueso Victoria)           14.29%                                   0.006643

 

Ancient0004 (tejido Victoria)             15.25%                                   0.012726

 

2.-La muestra Ancient0003 (mano tridactila gigante) mostró un mapeo muy alto con el genoma humano 97%.

 

3.-También es notable que las muestras Ancient0002 y Ancient0004. muestren tasas de coincidencia muy bajas en una de las bases de datos más confiables y precisas (NCBI).

 

4.-Sin embargo, las bases de datos NCBI no contienen todos los organismos conocidos existentes en el mundo por lo que podría haber una gran cantidad de organismos posibles que explican el ADN incomparable o podrían ser algunas regiones excluidas, o difíciles de secuenciar, comunes a muchos de los organismos explicando las muestras en los protocolos aplicados para los genomas informados en NCBI.

 

5.-Las bases de datos actuales en NCBI están en constante crecimiento, por lo que podría aun mejorar la comparación en el futuro.

 

6.-Pronto se pueden construir bases de datos más completas que incluyan más genomas microbianos y /o eucariotas que pueden arrojar luz sobre la naturaleza del ADN incomparable por el momento con las especies terrestres existentes.

 

Se podría realizar un análisis enfocado en solo los segmentos de ADN no igualados para confirmar dos veces que estos no son artefactos de la secuenciación o amplificación protocolos.

 

Los protocolos de ADN antiguo están en continua mejora dada su sensibilidad y características degradativas de este tipo de muestras. Recomendamos estudios adicionales para aceptar o descartar cualquier otra conclusión.

Recomiendo a los lectores leer las condiciones de extraccion y secuenciacion del AND antiguo (PALEO-ADN) para que amplien sus conocimientos al particular dentro de esta pagina.

Informo a los lectores de este espacio web que debido a la estructura y concepcion de esta pagina, ella no me permite copiar documentos en PDF. Por esta razon os envio al sitio de Inkari llamado  ALIEN PROJET a donde podran encontrar una version completa de los documentos en Ingles y en Frances de los analisis de ABRAXAS.

Este solo es un resumen para las personas que quieran tener una idea simplificada de los resultados en espanol. Los graficos y tableros de resultados los encontraran anrexos en los documentos PDF abiertos para el publico por el instituto Inkari. 

M.a SAIZ, M.a J. ÁLVAREZ-CUBERO, L. J. MARTÍNEZ-GONZÁLEZ, J. C. ÁLVAREZ y J. A. LORENTE

 

ADN NUCLEAR PARA EL ESTUDIO DE MUESTRAS ANTIGUAS

 

En 1953, Watson y Crick describieron por primera vez la estructura del ADN (Watson y Crick., 1953:737-738).

 

El ADN nuclear está formado por una hélice de doble cadena, donde éstas permanecen unidas mediante un proceso de hibridación. Estas dos hebras son antiparalelas y complementarias, por lo que conociendo la secuencia de una hebra podemos determinar la secuencia de la otra hebra.

 

Pero no todo el ADN que conforma el genoma es codificante; un 75% de todo el material genético de un individuo corresponde a ADN que no tiene expresión génica. Se ha comprobado que este ADN no codificante tiene gran importancia a nivel promotor, regulador y estructural.

 

De este 75%, un 60% corresponde a secuencias de copia única y hasta un 40% a secuencias repetitivas de ADN. A comienzos de los 80, R. Higuchi publicó, en la revista Nature, la secuencia de un fragmento de 229 pb de ADN mitocondrial (ADNmt) a partir de piel momificada de un Equus quagga; un animal extinguido relacionado con las cebras, de aproximadamente 140 años de antigüedad (Higuchi et al., 1984:282-284).

 

EL ADN ANTIGUO UNA HERRAMIENTA PARA DESCIFRAR LA HISTORIA

 

Las investigaciones con ADN recuperado de restos antiguos comenzaron a hacerse cada vez más numerosas. A finales de los 80, Hagelberg y posteriormente Hänni describieron la extracción de ADN humano y su posterior caracterización, el primero en tejido óseo y el segundo en dientes, de ADN procedente de muestras con diferentes datas, desde 150 a 5500 años de antigüedad.

 

Estos trabajos demostraban que el ADN podía ser recuperado utilizando procedimientos de biología molecular en muestras de distinta índole y con distintas datas (Hänni et al., 1990:365; Hagelberg y Clegg., 1991:45-50).

 

De forma simultánea a los estudios de Hagelberg y Hänni; S. Pääbo presentó sus resultados al obtener secuencias de ADN a partir de restos humanos antiguos mediante la clonación de secuencias repetitivas Alu (ADN nuclear), a partir de piel de momias egipcias de 2500 años de antigüedad (Pääbo, 1985:411-417 y 644-645).

 

Gracias a la aparición de una nueva técnica molecular basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), se proporcionaron nuevas perspectivas en este campo. El estudio del ADN de restos humanos ha sido también en estos últimos años un gran campo de estudio, lo que ha proporcionado pruebas para apoyar teorías en el origen de nuestra especie o descifrar la secuencia del Hombre de Neandertal.

 

También estos estudios en ADN antiguo han apoyado la reconstrucción de las relaciones filogenéticas.

 

DIFICULTADES

 

1.- La escasez del ADN

2.- La fragmentación de las cadenas de ADN

3.- Las modificaciones moleculares del ADN

4.-La presencia de inhibidores de la PCR en los extractos.

 

Además de éstos, la contaminación del material genético antiguo con ADN exógeno, han puesto en duda la autenticidad de muchas investigaciones (Pääbo et al., 1989:9709-9712; Gilbert et al., 2003:32-47 y 48-61; Pääbo et al., 2004:645-679).

 

Elección de las muestras a menudo, un laboratorio de genética forense ha de trabajar con muestras de ADN que no se encuentran en condiciones óptimas.

 

La muestra puede tener una cantidad limitada, estar degradada y/o puede haber estado expuesta a agentes ambientales.

 

Por ese motivo, las técnicas empleadas en el laboratorio son críticas para la máxima obtención de ADN en muestras degradadas y limitadas. Debido a ello, es de vital importancia el tipo de muestra disponible para los análisis de ADN.

 

Los tejidos de elección preferenciales para la determinación de ADN antiguo son huesos y dientes. Ambos tejidos protegen el ADN de la degradación y de ataques biológicos debido a su robustez física y química; en la mayoría de los casos éstos son los únicos tejidos que pueden ser analizados.

 

Sin embargo, los mecanismos por los que el ADN es preservado en el hueso no están bien caracterizados (Collins et al., 2002:383-394; Pruvost et al., 2007:739). Los dientes son el tejido más duro del cuerpo humano debido al esmalte dental y son una buena elección ya que el material genético está protegido por tejidos calcificados (Girish et al., 2010:63). El tejido blando encontrado en la pulpa se compone de odontoblastos, fibroblastos, células endoteliales, nervios periféricos, células mesenquimales indiferenciadas y otros componentes nucleados de la sangre ricos en ADN (Muruganandhan y Sivakumar, 2011:38).

 

La pulpa es el tejido más empleado para la obtención de ADN ya que es abundante y tiene una baja probabilidad de contaminación con ADN no humano (Girish et al., 2010:63).

 

EL ADN ANTIGUO UNA HERRAMIENTA PARA DESCIFRAR LA HISTORIA

 

El ADN tiene una gran afinidad por la hidroxiapatita y la degradación del ADN está ligada a la pérdida de cristalinidad de la hidroxiapatita, aunque también se ha relacionado con la pérdida de colágeno.

 

Las características óseas están directamente relacionadas con la supervivencia del mismo así como con la protección del ADN a la degradación. La densidad ósea es uno de los factores intrínsecos más importantes en la supervivencia del hueso, con diferencias significativas entre hombres y mujeres.

 

Además, existen diferencias de densidad ósea en diferentes partes del esqueleto, teniendo la región media de los huesos niveles más altos. Es muy complicado estimar el estado de conservación del ADN a través de una simple inspección macroscópica.

 

Sin embargo, hay varios rasgos característicos de una buena muestra. Los huesos han de ser duros, pesados y con una estructura compacta. Los huesos largos son preferibles a los huesos porosos como pelvis, escápula y partes del cráneo.

 

Los huesos no han de tener fisuras o ataques microbianos. Excavación de las muestras Se ha demostrado que las muestras extraídas en zonas cálidas están peor preservadas y son más vulnerables al estrés termal y a la contaminación durante la excavación.

 

Por ello, las muestras se han de mantener de forma constante a temperaturas relativamente bajas. Se han de excavar rápidamente, puestas directamente en bolsas estériles y almacenadas en cajas frías o un sitio sombrío. Si no se disponen de sitios fríos, se recomienda poner las muestras en bolsas y enterrarlas lo suficientemente hondas como para que el calor no las alcance.

 

Los restos humanos se contaminan fácilmente por lo que se recomienda reducir el riesgo de contaminación al máximo llevando al menos guantes, bata y mascarilla.

 

Para análisis genéticos, cada muestra se ha de extraer por duplicado para su autenticación. Tratamiento y almacenamiento de las muestras Siempre que sea posible se han de usar guantes para la manipulación de la muestra.

 

Cada espécimen se ha de depositar en una bolsa independiente para evitar contaminaciones entre muestras. En caso de que las muestras se encuentren húmedas y no se puedan transportar refrigeradas, se han de preservar en bolsas de papel, para evitar el deterioro de las mismas.

 

Se recomienda no lavar las muestras, ya que es una fuente de contaminación. Para minimizar el riesgo de contaminación post-excavación, las muestras se han de almacenar en un ambiente frío, seco y oscuro.

 

Muestras control:  En ocasiones, las muestras pueden contaminarse por la tierra que las rodea. Es de gran ayuda monitorizar esta contaminación tomando muestras control del suelo de diferentes partes de la excavación y éstas han de ser tratadas como muestras independientes.

 

Además, en caso de tratar con restos humanos, se han de tomar muestras de todos los individuos que manipulen las muestras para asegurar que la contaminación por los arqueólogos sea evitada y controlada.

 

Los resultados de aDNA han de ser replicados en al menos, un segundo laboratorio por lo que se han de guardar submuestras en áreas donde no se trabaje con ADN (Bollongino et al., 2008:91-98).

 

Tratamiento de las muestras en el laboratorio Una vez recibidas las muestras en el laboratorio, se han de identificar y anonimizar. Se recomienda sacar fotografías de todos los restos recibidos, ya que en muchas ocasiones se ha de destruir por completo la muestra para poder realizar los análisis de ADN.

 

Para poder extraer ADN de restos óseos o dientes, primero se ha de limpiar y pulverizar la muestra. Tanto en los análisis forenses como en análisis de aDNA, encontraremos muy poca cantidad de muestra, estará degradada o alterada químicamente.

 

Por ello, el problema de la contaminación se evalúa de forma continua mediante el uso de controles al trabajar con muestras con bajo número de copias o degradadas.

 

Existen bases de datos de ADN del personal de laboratorio, se realizan controles de los reactivos, controles positivos y negativos e incluso en ocasiones, controles de los viales empleados.

 

Además, se toman medidas adicionales contra la contaminación que incluyen el diseño del laboratorio y la preparación de los reactivos. Los laboratorios se estructuran en dos habitaciones separadas, una empleada para la extracción del ADN y la otra para la amplificación y posterior procesamiento.

 

Algunos laboratorio, incluyen un flujo de aire con presión negativa y positiva, así como vestíbulos.

 

Criterios de autenticidad al trabajar con aDNA

 

Para que los datos obtenidos en el análisis de aDNA sean fiables se han de tener en cuenta los siguientes criterios:

a.- Toma de las muestras: Como ya se ha explicado anteriormente, los operarios han de tener mucho cuidado en la toma de muestras e intentar evitar todo tipo de contaminaciones. Una vez en el laboratorio, las muestras se han de dividir y realizar réplicas del análisis en laboratorios independientes.

b.- Preservación bioquímica: El principal componente molecular del diente y el hueso es colágeno. Las proteínas y el ADN sufren procesos similares de oxidación e hidrólisis. Por ello, el análisis de las alteraciones en las proteínas del hueso o diente permitirá a los investigadores escoger aquellas muestras que presentan características favorables a la preservación del ADN.

c.- Controles de extracción y amplificación: El análisis del ADN antiguo se ha de llevar a cabo en laboratorios empleados exclusivamente para la extracción de muestras con bajo número de copias de ADN. Se han de realizar extracciones en blanco y controles de PCR exhaustivos para monitorizar los niveles de contaminación.

d.- Comportamiento molecular: El ADN de restos fósiles está degradado en pequeños fragmentos (150 pares de bases). Una manera de comprobar la autenticidad del extracto de aDNA es observar la presencia de fragmentos mayores de 300 pares de bases.

e.- Cuantificación: Conocer la cantidad de ADN presente en el extracto ofrece gran información sobre el estado de preservación de la muestra.

f.- Amplificación: Se han de amplificar fragmentos solapantes pequeños. Se han de reproducir los resultados de la misma muestra en el laboratorio y de otras submuestras en otros laboratorios.

g.- Análisis de fauna: En caso de restos de homínidos, donde puede ser complicado determinar la secuencia endógena, es conveniente tener muestras de la fauna del mismo sitio que puedan dar información indirecta sobre la preservación del ADN.

h.-Confirmación filogenética: Se han de analizar las secuencias de ADN filogenéticamente. La presencia de nuevas secuencias que no se encuentran en la base de datos, sobretodo de ADN mitocondrial, no aseguran su autenticidad (Jobling et al., 2003).

i.-Degradación del ADN El grado de degradación de la muestra varía en función de la exposición a la luz, humedad y temperatura. La contaminación bacteriana y fúngica y la rápida colonización de los mismos, derivarán en la degradación física, química y bioquímica del ADN genómico del espécimen de interés (Bender et al., 2004:135-140). IMPORTANTE En las células vivas, la integridad del ADN se mantiene mediante procesos de reparación enzimáticos. Tras la muerte de un organismo, los compartimentos celulares que contienen enzimas catalíticas se rompen.

 

Como consecuencia, el ADN se degrada rápidamente por estas enzimas. Además, el ADN se ve sometido a procesos de degradación causados por bacterias, hongos e insectos. La exposición al agua es probablemente la mayor fuerza destructiva que actúa sobre el ADN.

 

Se ha demostrado que el agua inicia la rotura de la cadena del ADN mediante la unión a los enlaces glucosídicos. Por ello, un paso crítico en la preservación del ADN es la rápida deshidratación de los tejidos.

 

El pH del ambiente también juega un papel crucial en la preservación a largo plazo del ADN. Ambientes ácidos incrementan el ratio de degradación del ADN.

 

La exposición a luz ultravioleta causa un gran daño y degradación del ADN. Limitar la exposición de la muestra a la luz ultravioleta, como un rápido enterramiento, es importante para minimizar las consecuencias del daño UV.

 

Contaminación del ADN La contaminación con ADN de otros especímenes que no son el estudiado (ADN exógeno) es un problema complejo que aparecerá en cualquier estudio con ADN antiguo, debido a la limitada cantidad de ADN que encontraremos en la muestra.

 

La alta sensibilidad de la PCR y su habilidad para amplificar bajas cantidades de ADN puede generar problemas si no se toman medidas extraordinarias cuando se trabaja con muestras comprometidas.

 

Se han de seguir protocolos validados en el laboratorio para evitar contaminación de muestras con mayor cantidad de ADN.

 

Hay tres fuentes potenciales de contaminación;

 

A.-Contaminación de la muestra con ADN que se encuentra en el ambiente depende principalmente de la recogida de la muestra y del cuidado que haya tenido el equipo que la ha tomado

B.-Contaminación debida a la transferencia de ADN entre muestras mediante la preparación de la muestra y la causada por productos del ADN amplificado. La contaminación debida a la transferencia de ADN entre muestras mediante la preparación de la muestra y la causada por productos del ADN amplificado pueden ser fácilmente controladas mediante procedimientos de laboratorios apropiados y la separación de áreas de trabajo. Las áreas de trabajo se han de limpiar meticulosamente antes y después de cada uso, y siempre que sea posible se ha de trabajar en campanas de flujo laminar. Todo el material que vaya a ser empleado se ha de exponer a luz ultravioleta para minimizar la contaminación. Además, la posible contaminación ha de ser monitorizada mediante controles negativos (muestras que contienen todos los reactivos excepto ADN) durante la extracción y la amplificación que se procesan del mismo modo que los indicios de ADN.

Inhibición de la PCR La presencia de inhibidores de la reacción de PCR es otro reto que se ha de afrontar en el trabajo con muestras antiguas. Los inhibidores pueden proceder de múltiples focos como la melanina, el suelo y proteínas. Los inhibidores interfieren en la lisis celular necesaria para la extracción del ADN. Además, disminuyen la actividad de la polimerasa y con ello dar lugar a resultados falsos-negativos.

 

Este tipo de muestras producen a menudo perfiles parciales que son similares a muestras con ADN degradado. Los inhibidores de la PCR pueden ser eliminados mediante la dilución del extracto o con un paso previo a la amplificación que separe el ADN extraído del compuesto inhibitorio.

 

 

ANALISIS DE RESULTADOS DE ADN EFECTUADOS MEDIANTE VARIOS METODOS EN DIVERSOS LABORATORIOS A LOS CUERPOS DESECADOS ENCONTRADOS EN LA REGION DE NAZCA-PALPA EN PERU EN 2015

 

Por: Clara Inés Martinez de la Espriella

Lic en Biología et Química : Universidad de Narino -Colombia

Equivalencia: Diploma Biología y Química: Universidad de Ginebra Suiza

Diploma en Bioquímica experimental:

Centro Nacional Suizo de investigación Nyon- Suiza

Post-grado en Estadística Universidad de Neuchâtel- Suiza

Dr. Ingeniería Agronómica Universidad de Narino -Pasto- Colombia

Curso experto Universitario en Genética Forence: EICYC - Universidad Isabel I - España 

 

I.-RESUMEN

 

Mi participación en este estudio se limita a verificar, interpretar y divulgar en el marco educativo los resultados de análisis de ADN realizados por varios laboratorios a nivel mundial de los cuerpos desecados tridactilos de Nazca y Palpa.

Que biólogo, biólogo molecular, genetista, bioquímico entre otros no se ha sentido atraído por la diversidad organismica y/o historia biogeografica? Fue mi interés en la divulgación científica en general y la filogenética en particular, los que me llevaron a interésarme en esta investigación.

 

Cuando se trata de resolver casos como este, donde se aborda la hipótesis mayor : Se esta frente a dos posibles nuevas especies filogeneticas? Es plausible, plantearse esta hipótesis con base la observación y medición anatómico-morfológica de características parecidas o lejanas a homo sapiens de estos cuerpos tridactilos desecados.

 

Cuando se tiene que verificar correspondencias genotipicas, para comparar su correspondencia con los fenotipos que presentan las posibles especies estos aspectos se pueden abordar con la herramienta científica mas actual y objetiva que es el estudio del ADN en general y del genoma de las posibles especies en particular. Siguiendo esta lógica, se comenzó con la exploración de perfiles genéticos con huella autosomica de ADN. Estos análisis exploratorios inducen en la mayoría de análisis la no correlación con el ADN de homo sapiens para los especímenes estudiados.

Luego se profundizo en el estudio del ADN nuclear con la obtención de secuencias masivas de nueva generación Illumina de los cuerpos desecados tridactilos en el laboratorio BioTecmol (Mexico) y la Universidad federal de San Petersburgo de Rusia. Comparando estas secuencias de muestras provenientes de cuerpos tridactilos desecados en estudio con las secuencias existentes de otras especies en las bases de datos Blast para identificar o descartar similitudes genomicas, se encontró que el ADN de estas posibles especies posee una parte de ADN desconocido de aproximadamente 50% y un 20% de este ADN es correspondiente a Bacterias y otros microorganismos en todas las secuencias masivas.

 

Llegado  a este estado en esta investigación; se puede decir que se vislumbran dos posibles especies aun no completamente identificadas filogeneticamente:

 

i.-Una formada por Maria y posiblemente Wawita con mas cercanía morfológica a homo sapiens que su correspondencia con el ADN humano varia entre 23.8% y 30,803% con el ADN de homo sapiens. Sin embargo el hecho que Wawita tenga sus dedos mutilados no permite a nivel morfologico (no genetico) pronunciarse. Por lo se realizaran de ser posible mas estudios a este particular.

 

ii.-Otra posible especie, de los cuerpos tridactilos desecados de aproximadamente 60 cm y cuya correspondencia con el ADN de homo sapiens es de 19.8% segun la secuenciacion masiva de ADN nuclear realizado a Victoria ( laboratorio BoiTecmol Mexico) resultado profundisado con la ultima secuenciacion del laboratorio Canadiense Cen4Gen que fue analizada bioinformaticamente por Abraxas. Segun este resultado Victoria  tiene solamente un 9% de secuencias comunes con el ADN humano (genoma de referencia GRCH38) y 15,25% con un millon de especies contrastadas en la base NCBI.(25)

 

iii.-Cabe anotar que la clasificación de lecturas no asignadas dentro de las secuenciaciones masivas se sometieron a análisis de clasificación utilizando  Kraken.

Este asigna etiquetas taxonómicas a las lecturas de secuenciación basadas en la alineación exacta de k-mers contra grupos de genomas (bacteriales, plásmidos, virus, etc.). Primero se construyó una base de datos de referencia a partir de bacterias, arqueas y Genomas virales en RefSeq. Esta base de datos era considerablemente grande y medía unos 8 gigabytes de tamaño. Para eliminar la fuente principal de resultados positivos falsos, como las secuencias de baja complejidad en los genomas mismos se ejecuto el programa 'restos' en todos los genomas y luego se construyo la base de datos a partir de estos ‘restos’ de genomas. Al final, alrededor del 27.7% de las lecturas no asignadas fueron clasificadas. Esto contribuyó a clasificar el 18,5% del total de lectura. De esta manera se asignaron varias clasificaciones taxonómicas bacterianas y virales y las lecturas no clasificadas fueron obtenidos como archivo fastq.

 

En la nuestra de Maria aproximadamente el 33,67% de las lecturas se alinearon con el genoma humano, el 18,41% de las lecturas se asignaron a bacterias.El resto 47.90% del genoma quedaron sin clasificar.

 

iv.-Según los estudios de ADN mitocondrial realizados por el Instituto Inkari-Cuzco en el laboratorio Lakehead University Paleo-DNA con dos piezas sueltas; Una cabeza suelta la que se le extrajo tejido (de posible cerebro) y una grande mano se puede vislumbrar la posibilidad que en lote presentado por el posible descubridor ademas de los cuerpos tridactilos completos objeto central de este trabajo; Se encuentren piezas sueltas que sean de esculpido o armado antiguo. Se puede afirmar esto ya que existe una unidad en el ADN mitocondrial analizado de estas piezas por Lakehead University Paleo-DNA. El ADN no proviene de varias especies. La comparación de la secuencia arrojada de ADN mitocondrial para el tejido extraído de la cabeza suelta arroja 100% de correspondencia solamente con el ADN de homo sapiens antiguo. Un armado con otras especies se puede excluir.

 

v.-La mano grande tridactila en el análisis de ADN mitocondrial arroja una correspondencia de 99% con el ADN de homo sapiens. Su antigüedad verificada por análisis de radio isótopo C14 y contrastados en varios laboratorios ( Beta Analytics (USA); GTCA Caribean(Puerto Rico); UNAM (Mexico) )es de 7000 BP. Tambien se debe decir que la grande mano tridactila fue secuenciada por Cen4Gen y bioanalizada por Abraxas. Su correspondencia con el ADN de homo sapiens en de 97%.

Estos resultados dejan la posibilidad de provenir los huesos de la mano de un primate o un hominido antiguo.

Tanto la cabeza suelta fue datada por radio isotopo carbono 14 por varios laboratorios( Beta Analytic; UNAM; GTCA Caribean) con un promedio  de 1010 BP siendo verificada asi la antiguedad de estas piezas sueltas.

 

vi.-Estos análisis practicados a piezas sueltas no tienen punto de comparación con los otros análisis de ADN nuclear practicados a los cuerpos tridactilos desecados completos.

 

vii.-Estos resultados causaron controversia al inicio de esta investigación. Ellos fueron mal interpretados por algunas personas en las redes sociales haciendo corresponder los analisis de ADN mitocondrial de estas piezas sueltas  a una designación equivocada  con el cuerpo desecado Maria.

Debe quedar claro: Los resultados de ADN mitocondrial del laboratorio LAKEHEAD UNIVERSITY-PALEO-DNA, no corresponden ni a Maria ni a ninguno de los cuerpos tridactilos de 60 cm estudiados con radiografías, tomografías, análisis morfológico y estudio de ADN por BioTecmol (Mexico) la Universidad San Petersburgo de Rusia y Cen4Gencon analisis bioinformatico por ABRAXAS. Cualquier persona que confunda estos resultados, esta mostrando un desconocimiento del presente estudio y así esta induciendo al error voluntariamente o involuntariamente.

 

Mi trabajo y la participación en este caso es a titulo independiente y benévolo en tanto que responsable de la ONG SCRIT con personeria en tramite en Suiza-Francia. No tengo pretensión de reconocimiento científico institucional. Actúo basada en mi ética e interés por que él conocimiento científico pueda popularizarse estando asi al alcance de todos.

 

Todos conocemos que la sociedad del siglo XXI necesita que las personas seamos educadas en el pensamiento humanístico y crítico y que la educación no elitista les haga capaces de abrir nuevos horizontes de futuro en su propio beneficio. Según un análisis serio, responsable y detallado de los resultados de los análisis de ADN que he podido estudiar, me siento en la responsabilidad de divulgar a un público interesado de manera imparcial y objetiva el avance de esta investigación.Trato de hacerlo en la medida en donde se producen nuevos resultados de los laboratorios. Esta practica, la enmarco en un concepto de libertad de expresión, de respeto, de transparencia y de pleno ejercicio de mis derechos y deberes en democracia. No tengo ni pretensiones académicas o laborales en la actualidad que me impidan exponer mi perfil profesional relacionado con la ciencia cuando abordo este caso. No tengo un ego me haga preocupar, sobre mi prestigio y como cuidarlo. Talvez, esto me preocupo cuando fui joven, pero hoy tengo la madurez para asumir este reto académico.

 

Mi credibilidad como persona principalmente esta basada en mi historia de vida. En la que el sacrifico, el estudio y la disciplina en condiciones adversas y en diferentes países en donde he vivido, han sido los pilares de mi superación e integración personal y profesional y de lo que pueden dar fé mi empleador el estado de Ginebra y mis colegas de trabajo. No creo que mis títulos y diplomas universitarios que la vida me ha permitió realizar, puedan darme credibilidad como persona humana y justificar así mi participación en esta investigación. Ella se basa en la neutralidad, que aprendí de Suiza como el mas bello valor de paz real y el respeto a las leyes e instituciones puesta al servicio de comunicar de manera transparente e imparcial los resultados y análisis de los test de ADN emitidos en el marco de esta investigación. Actualmente soy profesora jubilada del departamento de Instrucción publica del Canton y República de Ginebra-Suiza.

 

II.- ABSTRACT

 

My participation in this study is limited to verify, interpret and disseminate in the educational framework the results of DNA analysis issued by several laboratories worldwide of the tridactyl dried bodies of Nazca and Palpa.

 

What biologist, molecular biologist, geneticist, biochemist and others have not been attracted to organismic diversity and / or biogeographical history? It was my interest in scientific dissemination in general and phylogenetics in particular, which led me to take an interest in this research. When it comes to solving cases like this, where the major hypothesis is addressed: Is this in front of two possible new phylogenetic species?

 

It is plausible to consider this hypothesis based on the observation and anatomical-morphological measurement of similar or distant characteristics to homo sapiens of these dried tridactyl bodies.

 

When it comes to verifying genotype correspondences, to compare their correspondence with the phenotypes that present the possible species; These aspects can be addressed with the most current and objective scientific tool that is the study of DNA in general and the genome of possible species in particular.

 

Following this logic, we began with the exploration of genetic profiles with an autosomal DNA trace. These exploratory analyzes induce in most analyzes the non-correlation with the DNA of homo sapiens for the specimens studied.

 

Then, the study of nuclear DNA was intensified with the obtaining of new Illumine generation massive sequences of the tridactyl dried bodies in the BioTecmol laboratory (Mexico); Cen4GEN et ABRAXAS Tech and the Federal University of St. Petersburg in Russia.

Comparing these sequences of samples from tridactyl bodies dried in the study with the existing sequences of other species in the Blast databases to identify or rule out genomic similarities, it was found that the DNA of these possible species possesses a part of unknown DNA of approximately 50.percentage and 20% corresponding to Bacteria and other microorganisms.

 

In the current state where this investigation has arrived; it can be said that two possible species not yet completely phylogenetically identified are glimpsed:

i.-A more clearly studied and formed by Maria and possibly Wawita with more morphological closeness to homo sapiens but whose correspondence with human DNA varies between 23.8% and 30.803% with the DNA of homo sapiens.

ii.-Another possible species, that of the dried tridactyl bodies of approximately 60 cm and whose correspondence with the DNA of homo sapiens is currently of 19.8%. In this group there are still missing results of the complete mass sequencing that is about to end in BioTecmol and the Saint Petersburg University of Russia.

iii.-Classification of readings not assigned by exact alignments of k-mers The unassigned readings from the previous alignment step were subjected to classification analysis using Kraken. This assigns taxonomic labels to sequencing readings based on the exact alignment of k-mers against groups of genomes (bacterial, plasmid, virus, etc.). First, a reference database was constructed from bacteria, archaea and viral Genomes in RefSeq. This database was considerably large and measured about 8 gigabytes in size. To eliminate the main source of false positive results, such as low complexity sequences in the genomes themselves; for example, a string of 31 or more consecutive As, the 'remains' program was run on all genomes and then the database was constructed from these 'leftover' genomes.

 

The kraken analysis was run for 6 hours on an EC2 t2 in the Amazon AWS cloud with 4 high-power CPUs and 16 GiB of RAM. In the end, about 27.7% of the unassigned readings were classified.

 

This contributed to 18.5% of the total reading of the sample. Several bacterial and viral taxonomic classifications were assigned and the unclassified readings were obtained as fastq file. In Maria's ours approximately 33.67% of the readings were aligned with the human genome, 18.41% of the readings were assigned to bacteria. The rest 47.90% of the genome remained unclassified.

 

iv.-It is possible to see the possibility that in the batch presented by the possible discoverer there are loose pieces that are old-fashioned, as in the case of a loose head from which tissue was removed (possible brain). The first situation that throws this analysis is that there is a unit in the mitochondrial DNA analyzed. He does not come from several species. The comparison of the thrown sequence of mitochondrial DNA shows 100% correspondence with the DNA of homo sapiens.

 

A large tridactyl hand was also analyzed with mitochondrial DNA analysis. The results show a 99% correspondence with homo sapiens.

v.-These results caused controversy at the beginning of this investigation. They were misinterpreted by some people in the social networks making these results correspond to a wrong designation of the sample from where the mitochondrial DNA analysis was carried out with the dried body Maria. The mitochondrial DNA results of the LAKEHEAD UNIVERSITY-PALEO-DNA laboratory do not correspond to either Maria or any of the 60 cm tridactylic bodies studied with radiographs, tomographies, morphological analysis and DNA studies.

By BioTecmol (Mexico); Cen4GEN (Canada); ABRAXAS (Mexique) and the Saint Petersburg University of Russia. Anyone who confuses these results is showing an ignorance of the present study.

 

vi-These results correspond as mentioned before to tissue and bone extracted from a large tridactyl loose hand (dated with C14 at 7270 BP the hand skin and at 1080 BP the hand bone, Laboratory GTCA Puerto Rico) and extracted tissue of a loose head (possibly brain) with an antiquity of 1010 BP GTCA Puerto Rico and 7000 BP Laboratory Beta Analytics USA.

 

vii.-Many of these cases have been or are of historical (or current) controversy when it is not deepened. The only way to respond scientifically to the hypotheses raised by the present work, is to practice deep sequences in the bodies under study in order to establish the comparison between genomic sequences of different types of living organisms.

 

The DNA results complement the biological studies of the possible new species and have been carried out simultaneously with these studies.

 

My work and participation in this case is in a benevolent capacity as the head of the NGO SCRIT based in Switzerland-France. I have no pretension to scientific institutional recognition. I act based on my ethics and interest so that scientific knowledge can be popularized and made available to everyone. I think we all know that 21st century society needs people to be educated in humanistic and critical thinking and that non-elite education makes them capable of opening new horizons for the future in their own benefit.

 

According to a serious, responsible and detailed analysis of the results of the DNA analysis that I have been able to study, I feel responsible for divulging to an interested public in an unbiased and objective way the progress of this investigation. I try to do it to the extent where new laboratory results are produced. This practice, I frame it in a concept of freedom of expression, respect, transparency and full exercise of my rights and duties in democracy. I do not have any academic or work pretensions currently that prevent me from exposing my professional profile related to science when I approach this case. I do not have an ego that makes me worry, about my prestige and how to take care of it. Maybe, this worried me when I was young, but today I have the maturity to take on this academic challenge.

 

My credibility as a person is mainly based on my life story. In which the sacrifice, study and discipline in adverse conditions and in different countries where I have lived, have been the pillars of my personal and professional improvement and integration. I do not believe that my university degrees and diplomas that life has allowed me to perform, can give me credibility as a human person and justify my participation in this research. It is based on neutrality, which I learned from Switzerland as the most beautiful value of real peace and respect for the laws and institutions put at the service of communicating in a transparent and impartial manner the results and analysis of the DNA tests issued in the framework of this investigation. I am currently a retired professor of the Department of Public Instruction of the Canton and Republic of Geneva-Switzerland.

III.-HIPOTESIS:

 

Una vez obtenidas las radiografías y tomografías computarizadas exploratorias se imponía formularse las hipótesis de base de este trabajo:

 

i.-Conocer si el material en deposito se trataba de cuerpos, restos de organos y restos óseos verdaderos o armados.

 

ii.-Verificar la pertenencia o no pertenencia de algunos restos y de los cuerpos desecados tridactilos con la especie: Homo Sapiens

 

                                                                IV.-METODOLOGIA

 

Las muestras obtenidas por Gaia y Tercer milenio y que dan origen a las secuenciaciones masivas de los seres tridactilos de 60 cm, de Maria y de wawita  en BioTecmol(Mexico); Cen4GEN-ABRAXAS (Canada) y la Universidad de San Petersburgo-Rusia no tienen relación alguna con las muestras iniciales extraídas de un cráneo suelto de un supuesto ser tridactilo de 60 cm y de una grande mano tridactila. Las muestras de Victoria fueron realizadas siguiendo las normas del mas estrictas de protocolo. 

 

Al inicio de esta investigacion el instituto Inkari tomo muestras de una cabeza suelta antigua, de una mano grande suelta tridactila para los análisis de ADN mitocondrial y del cromosoma Y practicados en LAKEHEAD University-PALEO-DNA del Canada.

Es necesario dejar claro que teniendo en cuenta las diferencias de metodologías utilizadas en los diferentes tipos de análisis de ADN practicadas por los laboratorios se producen resultados en un principio dificiles a reagrupar entre si.

 

La Ong Inkari realizo en el laboratorio Paleo DNA de Lakehaed University del Canada un análisis mitocondrial de regiones hipervariables del genoma mitocondrial. Tambien realizo un test del cromosoma Y. Estos analisis de ADN fueron efectuados tanto para la grande mano suelta y para la cabeza suelta.

 

Los resultados de la prueba de identificación sexual:

Muestran que las muestras corresponden a un organismo masculino en ambos casos.

i.- Amel 1F 5’-(6FAM) CCC TGG GCT CTG TAA AGA ATA GTG-3’

i.- Amel 1R 5’-ATC AGA GCT TAA ACT GGG AAG CTG-3’

Los resultados se refieren únicamente a los elementos probados.

 

En lo que compete los analisis del ADN mitocondrial

Se obtuvo los resultados siguientes.

i.-Cerebro craneal  (cabeza suelta) Posibles Haplogrupos:  HV2 o B2a

ii.- Hueso de la grande mano  Posibles Haplogupos : U8a, L3, S HV

 

HV2 se originó hace 25,000 a 30,000 años en el cercano Oriente o el Cáucaso. Los miembros de este haplogrupo se movieron hacia el norte a través de las montañas del Cáucaso desde el Cercano Oriente y el Oeste a través de Anatolia. el haplogrupo B se encuentra en una frecuencia de alrededor del 17% en el sudeste asiático, y representa alrededor del 20% de toda China. Es uno de los cinco haplogrupos de ADNmt encontrados en los pueblos indígenas de las Américas.

Como vemos, tampoco los análisis de ADN mitocondrial son concluyentes sobre el origen geográfico de esta muestra. Estos analisis son utilizados en genética de poblaciones para investigar la posible determinación de haplotipos y haplogrupos humanos y asi verificar la genetica y migracion de poblaciones; En otras palabras el origen paterno y materno de la muestra analizada.

 

Los analisis de Lakehead University Paleo DNA del Canada no pueden compararse con el resto de analisis por las razones siguientes:

 i.-Para realizar estos analisis el laboratorio Lakehead University Paleo DNA parte de la hipotesis que las muestras provenientes de una cabeza suelta y una mano grande suelta tienen un origen humano.

ii.-Los analisis exploratorios de ADN (perfiles autosomicos) practicados a Maria y a Victoria pusieron de manifiesto que estas muestras no pertenecen a el ADN de homo sapiens. Por esa razon los equipos de Gaia-Tercer Milenio se plantearon la hipotesis del origen diferente de Maria, Victoria y Wawita con el ADN de homo sapiens.

iii. Las secuenciaciones masivas practicadas a Maria, Victoria y Wawita verifican con resultados claros la no pertenencia de estos especimenes analizados con el ADN humano.

iv.-Los análisis de ADN solicitados por Gaia-Tercer Milenio a BioTecmol, a la Universidad San Petersburgo-Rusia y a el laboratorio Cen4GEN complementado con un analisis bioinformatico de ABRAXAS sistema,  han permitido la obtención de secuenciaciones masivas de ADN nuclear y despues de contrastar con los genomas de las bases de datos de la bibliotecas Blast y NCBI el genoma de Victoria y Maria. 

Los resultados permiten afirmar la no correspondencia sus genomas con la mayoria de especies existentes en las bases de genomas Blast y NCBI. 

El genoma de Victoria  tiene una correspondencia de solamente 15,25% con un millon de genomas analizados en NCBI. Ademas,el genoma de Victoria con el genoma de homo sapiens tiene una correspondencia de solamente 9%.

Maria solo posee una correspondencia de 30% con el ADN humano. El resto, el 70% no es corresponde con el ADN de homo sapiens. Despues de afinar las comparaciones con la base BLAST se encontro que existe 20% del genoma de Maria que corresponde a Bacterias, Virus y Microorganismos. El 50% del ADN de Maria esta en estudio para verificar posibles correspondencias, pero hasta el momento segun tres laboratorios es desconocido.

v.-Los equipos de Gaia-Tercer Milenio con BoiTecmol, Cen4GEN, ABRAXAS y la Universidad de San Petersburgo no exploraron el ADN mitocondrial ni realizaron el análisis del ADN del cromosoma Y. En sus objetivos no se contemplo conocer el posible origen geográfico de los cuerpos desecados de Nazca y Palpa. 

 

Teniendo en cuenta el conjunto de estos resultados este trabajo puede parecer a un lector entendido en la materia, bastante heteroclito, por los objetivos diferentes que buscan los diferentes tipos de analisis de ADN practicados por cada equipo. Razon pour la cual pido tener mucha atencion a la parte de analisis de resultados y conclusiones de este trabajo.

 

vi.-El instituto Inkari efectúo un análisis exploratorio por huella autosomica en LAKEHEAD University PALEO DNA del Canada para analizar la correspondencia de las manos, pies y vertebras de Maria. Una persona externa al Instituto Inkari tomo muestras con autorizacion y comando él mismo estudio por huella autosomica al laboratorio Genetech de Sri Lanka, con el objetivo de poder confrontar  los resultados de estos dos análisis. Desgraciadamente este tipo de analisis de ADN por perfil autosomico no permite ser concluyentes sobre la similitud de manos, pies y vertebras de Maria porque su concepcion esta basada en la comparacion con los marcadores (locis CODIS) especificos para los cromosomas de homo sapiens. Ademas las tecnicas de purificacion del ADN antiguo no se utilizan en este tipo de analisis exploratorios de ADN lo que conleva a que no se pueda obtener una purificacion optima del ADN y aparescan alelos externos contaminantes con mucha frecuencia.

 

Sin embargo, hay que decir que la inicial utilización de los análisis de perfil autosomico, como metodología exploratoria es debido a que ellos permiten verificar en un grado simple y rapido la pertenencia o no pertenencia a la especie humana de los cuerpos desecados mediante la comparación de alelos con alelos de los Loci CODIS pertenecientes a homo sapiens. Hay que dejar claro que este tipo de analisis no permite responder a las preguntas tales como:  Fueron armados los cuerpos o si las partes de un cuerpo corresponden entre si. Ellos solo dan una idea de posibles correspondencias parciales que permiten formular hipotesis mas robustas basadas en tecnicas de analisis de ADN mas profundas. Solo con secuenciaciones masivas nucleares se puede abordar y plausiblemente responder  estas preguntas.

 

Los analisis de Perfil autosomico solo responden a la pregunta de base: Se esta frente a momias tridactilas (cuerpos desecados) que pertenecen a la especie Homo sapiens? 

 

Para conocer  si se debía o no continuar con el estudio de los cuerpos desecados se debia en primera instancia responder a esta pregunta y por eso se utilizaron los analisis de perfil autosomico basandose en la comparacion de segmentos del ADN de la muestra problema con regiones STPs (locis) situadas en los cromosomas humanos.(CODIS). Otra situación ligada a este tipo de análisis autosomicos y no menor, es que con este método exploratorio, el ADN obtenido en las muestras manejadas, no tienen grandes complicaciones con el cuidado previo por contaminación exógena. Esta situación se tenia clara, debido a las condiciones como los cuerpos fueron entregados al inicio por su posible descubridor.

 

Al finalizar el estudio del perfil autosomico el laboratorio Lakehead University Paleo DNA recomienda realizar una secuenciacion masiva de ADN nuclear para responder a la pregunta:

Fue Armada Maria a partir de una momia pre-Inca a la que se le manipularon manos y pies?

 

 Para ello el instituto Medico-Genetico de la Universidad de San Petesburgo

( MENDELEEVSKAYA LINE 3-RUSIA) realizo una secuenciacion masiva de ADN nuclear de manos, pies y vertebras para responder a esta pregunta.

 

Se extrajo y proceso ADN antiguo proveniente de manos, pies y vertebras de Maria con proteinase K. La proteinase K es una substancia endolitica utilizada en la destruccion de las proteinas en las preparaciones de acidos nucleicos. Ella rompe las uniones peptidicas sobre los lados carboxilicos de los amino-acidos.

 

Se realizo una purificacion electro magnetica por ocho veces consecutivas y se procedio a extraer el ADN antiguo de cada una de las muestras.

 

Se amplifico con PCR y se secuencio el ADN nuclear obtenido con la tecnologia Illumina.

Los resultados:

                                                                        TABLA

___________________________________________________________________________________

Maria                   Mano                                      Pie                                       Vertebra

___________________________________________________________________________________

 

ADN                  No coincidente                    No coincidente                  No coincidente

HUMANO

___________________________________________________________________________________

MANO             Coincidente                          Coincidente                        Coincidente

/PIE/

VERTEBRA

___________________________________________________________________________________

 

El laboratorio de genomica, del instituto medico-genetico de la Universidad de San Petesburgo concluye:

 

i.-Se puede afirmar que la Momia Maria (cuerpo desecado antiguo 1740+-30BP) es autentico ya que  el ADN de sus vertebras, manos y pies es correspondiente entre si.

ii.-Cualquier afirmacion de la manipulacion de este cuerpo queda descartada con los resultados obtenidos de la secuencias masivas analizadas en el laboratorio.

iii.- Se practicaron analisis de radio carbono 14 a todas las partes antes mencionadas obteniendose la misma antiguedad verificando asi que se trata de un cuerpo antiguo en todas sus partes con la misma antiguedad de 1740+-30BP.

 

Para tener mas detalles sobre este analisis esta el video complementario:https://www.youtube.com/watch?v=GgYs933gZoo

 

 

 

V.-INTRODUCCION

 

El genoma nuclear se localiza como su propio nombre lo indica en el núcleo celular y representa el 99% contenido de ADN celular total.

 

Se encuentra asociado de forma muy específica a las proteínas histonas formando unas estructuras filamentosas denominadas cromosomas que pueden ser visualizadas al microscopio en el núcleo de las células en la división celular.

 

Un cromosoma es básicamente una fina hebra de ADN. La molécula de ADN, portadora de la información genética, es una larga cadena doble compuesta de una unidad química que se repite a lo largo de la cadena: El nucleótido (3).

 

La cantidad total de ADN de una célula es alrededor de 3000 millones de nucleotidos. El genoma humano presenta una densidad de genes muy inferior a la que inicialmente se había predicho, con sólo 1.5 %2 de su longitud compuesta por exones codificantes de proteínas. Un 70 % está compuesto por ADN extragénico y un 30% por secuencias relacionadas con genes.

 

Del total de ADN extragénico, aproximadamente un 70 % corresponde a repeticiones dispersas, de manera que, más o menos, la mitad del genoma humano corresponde a secuencias repetitivas de ADN.

 

Por su parte, del total de ADN relacionado con genes se estima que el 95 % corresponde a ADN no codificante: pseudogenes, fragmentos de genes, intrones o secuencias UTR, entre otros (3).

 

Un gen es un segmento de ADN (cuyo tamaño puede variar entre 3000-100.000 nucleótidos) que contiene la información para la síntesis de una proteína. Se estima que el número de genes humanos es de 30.000, siendo desconocida en la actualidad la función de más del 50% de estos genes. Sin embargo, estos 30.000 genes solo representan una pequeñísima fracción 2 a 3 % del ADN total de una célula (2).

 

El resto de ADN, que representa la fracción mayoritaria del genoma nuclear humano, está compuesto en gran parte de secuencias de ADN repetitivo sin una función clara y que se suele denominar «ADN no codificante» en el sentido de que no codifica información para la síntesis de proteínas (4).

 

Es precisamente una fracción de este ADN no codificante la que más interés tiene en genética forense, ya que se trata de regiones de ADN con una gran variabilidad de tamaño entre los individuos de la población. Las regiones de ADN no codificante de mayor interés en genética forense son las denominadas regiones de ADN microsatélite SNPs.(7)

La principal fuente de variabilidad en los genomas de dos seres humanos procede de las variaciones en un sólo nucleótido, conocidas como SNP (Single nucleotide polimorphisms), en las cuales se han centrado la mayor parte de los estudios exploratorios con los cuerpos desecados. Dada su importancia, en la actualidad existe un proyecto internacional (International HapMap Project) para catalogar a gran escala los SNPs del genoma humano.

 

En este contexto, la denominación de SNP frecuentemente se restringe a aquellos polimorfismos de un sólo nucleótido en los que el alelo menos frecuente aparece en al menos el 1 % de la población. Hoy en día, la mayoría de los análisis de ADN se basan en el estudio simultáneo de un conjunto de 10 a 15 ( en el caso del analisis de perfil autosomico de manos, pies y vertebras de Maria practicado por Lakehead University Paleo-DNA ellos emplearon 20 locis) de estas regiones cortas SNPs distribuidas en los distintos cromosomas humanos.

 

Un «perfil genético y/o huella cromosómica y/o huella autosomica y/o perfil genético » es el patrón de estos fragmentos cortos de ADN ordenados por su tamaño. Dicho patrón es fácilmente convertible en un sencillo código numérico muy fácil de almacenar, manejar y comparar, ofreciendo un alto poder de discriminación genética tanto en la identificación de vestigios biológicos de interés como es el caso que hoy nos ocupa.

 

Estos perfiles genéticos tienen una procedencia al 50 % paterna y materna.

 

 

Los polimorfismos del cromosoma Y

 

A pesar de representar solo el 2% del componente cromosómico humano, el cromosoma Y posee unas características que le diferencian del resto de los cromosomas y le confieren gran utilidad desde el punto de vista tanto forense como antropológico en el estudio del ADN.

 

El análisis de ADN del cromosoma Y es muy utilizado en la genética de poblaciones ya que permite la determinación de haplotipos humanos o de especies.

 

En los dos análisis de LAKEHEAD UNIVERSITY PALEO DNA efectuados a pedido de Inkari para una grande mano tridactila y para una muestra proveniente del cerebro extraída de una cabeza sin cuerpo,  se obtuvieron los Haplogrupos Q para las dos muestras.

En este análisis de ADN del cromosoma Y se analizan marcadores bialélicos (mayoritariamente SNPs). Estos análisis están empezando a tener una gran importancia por su sensibilidad para poder ser analizados en muestras mínimas y por la posibilidad de definir con precisión el haplotipo y poder así dar datos sobre el origen geográfico posible de una muestra.

En cuanto a los microsatélites comparten sus características con los microsatélites de cromosoma autosómicos, pero además presentan características específicas como :

i.- No sufren ningún proceso de recombinación por su localización en la región no pseudoautosomal del cromosoma Y.

ii.-Su herencia es exclusivamente paterna, se traduce en su mantenimiento generación tras generación sin ningún otro cambio que los producidos por eventos mutacionales.

 

Ellos presentan un moderado nivel de polimorfismo cuando los comparamos con los STRs autosómicos.

 

Los polimorfismos de ADN mitocondrial

 

El ADN mitocondrial presenta las siguientes características:

 

El ADNmt humano es una molécula ADN circular, cerrado y de doble cadena, lo que le confiere mayor estabilidad (con respecto al genoma nuclear) frente a fenómenos de degradación.

 

Hasta no hace muchos años, el estudio de los polimorfismos de ADN se había centrado mayoritariamente en el análisis de marcadores nucleares.

 

Esto es debido a que, a lo largo de la historia de la genética, la idea de que los genes estaban ubicados en el genoma nuclear ha constituido uno de los pilares fundamentales para el estudio en general de todos los organismos eucariotas.

 

Sin embargo, el modo particular de herencia de algunos genes reveló que estos debían estar situados fuera del núcleo. Durante estos últimos años, el interés por este genoma extranuclear ha crecido considerablemente debido a aquellas peculiaridades que éste presenta respecto al genoma nuclear.

 

Este genoma se encuentra ubicado dentro de las mitocondrias y se conoce como ADN mitocondrial (ADNmt).

 

El ADNmt se presenta como un marcador con múltiples aplicaciones en el campo de la genética forense debido fundamentalmente a:

a.- Su modo de herencia

b.-Su elevada tasa de mutación

c.-A la existencia de miles de moléculas por célula, lo que permite su estudio en condiciones en las que el material biológico a analizar se encuentra en mal estado o en cantidad insuficiente para estudiar cualquier otro marcador nuclear.

 

También son empleados en genética forence y la exploración de correspondías con el ADN humano. A diferencia de la mayor parte de los organelos citoplasmáticos, las mitocondrias son lo bastante grandes como para observarse bajo microscopia óptica (0.5 μm-10 μm). Son orgánulos citoplasmáticos de doble cadena y son las responsables del metabolismo energético celular en las células eucarióticas.

 

El ADNmt mide 16.569 bp y fue secuenciado en su totalidad por primera vez en 1981 por Anderson y cols (20). La distribución de las bases difiere en las dos cadenas del ADNmt. Una de las cadenas de la molécula es rica en purinas y es conocida como la cadena pesada o H (heavy). La cadena complementaria es rica en pirimidinas. Mientras que el ADNmt significa menos del 1% del ADN celular total, este posee un gran número de copias.

 

Se estima que las células de mamíferos contienen varios miles de copias de ADNmt dependiendo del tipo de tejido. ·El ADNmt presenta herencia materna y en consecuencia: Todos los individuos de un mismo linaje materno exhiben la misma secuencia de ADNmt (exceptuando casos excepcionales en donde exista segregación de heteroplasmías en algún individuo del linaje o evidentemente mutaciones puntuales a nivel germinal).

 

Los polimorfismos que caracterizan al ADN mitocondrial son sobre todo Polimorfismos de secuencia. La utilización de la prueba del ADNmt para al resolución de casos judiciales forenses es muy reciente. Por su mejor comportamiento en muestras degradadas el ADNmt es esencial para muchos casos de identificación a partir de restos óseos.

 

VI.-SITUACION ACTUAL DE LA INVESTIGACION

 

En estos momentos de la investigación podemos decir que: La comparación de los resultados de los análisis exploratorios de huella autosomica practicados por diferentes laboratorios responden a algunas preguntas formuladas pero dejan varias otras preguntas sin resolver:

i.- Los análisis de huella autosomica del instituto de genomica de Mexico, como los de Genetech de Sri Lanka, como los de LAKEHEAD University Paleo ADN de Canada indican que las muestras de Maria no corresponden con el ADN humano. Esto debido a que la cantidad de alelos de los locis obtenidos de las muestras analizadas no corresponden al 100% con los alelos de los locis CODIS. Las razones de no amplificación de algunos locis no han sido conocidas ni profundizadas.

 

ii.- Emplear esta metodología de huella autosomica es inadecuada para responder a la hipótesis de si las manos, los dedos del pie y las vertebras de Maria corresponden al cuerpo desecado Maria. La comparación de los alelos obtenidos y comunes entre las partes del cuerpo de Maria muestran que existe una correspondencia parcial. El hecho de no llegar a que exista una correspondencia total con este tipo de analisis puede ser debida a la presencia de alelos provenientes de contaminantes externos como se puede ver en la lectura de los resultados de ADN de Lakehead University Paleo-DNA.

 

iii- El laboratorio Genetech en su informe avanza que en las muestras analizadas de Maria y Wawita existe una heteroplasmia por lo que los resultados deberán volver a realizarse. Inkari no recibio respuesta de este laboratorio a pesar que las muestras fueron tomadas por el Sr Steve Mera con el compromiso de poder establecer un contacto directo con el laboratorio que efectuo los analisis. La no amplificacion de alelos en 10 locis para Wawita muestra que el perfil autosomico fue imposible de realizar por este laboratorio de Sri Lanka.Esto pone en evidencia que este laboratorio no presenta una garantia para este tipo de analisis.

 

iv- Contrariamente los resultados de las secuenciaciones masivas de ADN nuclear en todos los equipos con el cuerpo desecado Maria son bastante cercanos en los porcentajes de secuencias del genoma de Maria con una media de 30.803% de correspondencia con el genoma de homo sapiens.

 

Estos exámenes muestran un ecart type de 4.98 entre los tres análisis para las secuenciaciones masivas de Maria.

 

v-En lo concerniente a los cuerpos desecados tridactilos de 60 cm los resultados de BioTecmol con una media de 19.82% de correspondencia de Victoria con el ADN humano muestran que el ADN no coincidente con otras especies es de significativo.

 

Los resultados para Victoria del laboratorio Cen4GEN analizados por bioinformatica por ABRAXAS arrojan despues de un millon de genomas contrastados en las bibliotecas NCBI, y tambien contrastados con la ultima secuenciacion del genoma humano (GRCh.38.p12) que el 84.75% del genoma de Victoria de no encaja en la biblioteca genomica mas actual. Solo 9% del genoma de Victoria corresponde con el genoma de homo sapiens en el estudio realizado por ABRAXAS.(ver analisis Abraxas en la parte inicial)

 

vi.- Para Wawita el único resultado de secuenciacion masiva que se tiene arroja una correspondencia con el ADN humano de 25.06%. Este análisis de secuenciacion masiva de exones fue practicado por la universidad federal de San Petersburgo de Rusia.

 

vii.-Se pueden prever en el futuro diversos estudios científicos multidisciplinarios apoyados con nuevas secuenciaciones masivas de ADN que tendrían por objetivo establecer una filogenia posible de los cuerpos desecados tridactilos de 60 cm y determinar de manera clara si efectivamente existen dos especies distintas genéticamente ente si.

 

Se espera para poder avanzar, y llegando al punto a donde se encuentra la investigación que la comisión del congreso de la república del Peru tome en consideración el proyecto de ley presentado ante la comicion del congreso por el Congresista Arquitecto Armando Villanueva Mercado.

 

Es indispensable que se pueda entregar los cuerpos para su estudio a una universidad peruana  y de preferencia la Universidad de ICA por ser el centro academico de la region a donde se realizo el hallazgo.

 

Es importante que  se verifiquen o refuten los estudios realizados hasta el día de hoy con los cuerpos desecados tridactilos de Nazca y Palpa, conocidos como Momias de Nazca. La comicion del congreso que estudia el proyecto de ley podra solicitar oficialmente a los laboratorios los analisis de ADN para que los expertos que el congreso  designe de forma neutra estudien los resultados.

 

Esperamos que la investigación podrá avanzar asi y encontrar el cause sereno que toda investigación científica requiere, tomando asi el tiempo que le corresponda para poder abordar las muchas preguntas e interrogantes que aun están por resolver.

 

Esta investigación creemos que sera de utilidad un día para los habitantes de las regiones de Nazca y Palpa y del Peru.

VII. INSTITUCIONES Y LABORATORIOS DE ANALISIS DE ADN PARTICIPANTES

 

i.-Trabajo exploratorio de los equipos:

 

Tercer Milenio-Gaia: Las primeras muestras enviadas por el instituto Inkari no permitieron al equipo de Gaia-Tercer milenio realizar estudios concluyentes de ADN ya que no se pudo extraer ADN viable de la muestra de la mano tridactila por la degradación del material.

 

Con el análisis de huella autosomica practicado en el instituto de genomica de Mexico para el tejido extraído de una cabeza suelta ( llamado cerebro en los análisis), no fueron concluyentes ya que 10 locis no fueron correspondientes con 13 locis CODIS (homo sapiens). Dos locis pertenecientes a la muestra (cerebro) no amplificaron. No se conoció las razones de su no amplificación. Estos resultados no fueron concluyentes. Razón por la cual, el Director de Tercer Milenio; Lic Jaime Maussan y un equipo de Gaia con el Ph.D Konstantin Korotkov viajo al Peru para obtener nuevas muestras in situ de uno de los cuerpos tridactilos desecados de 60 cm (Victoria cuerpo tridactilo sin cabeza) con su equipo de profesionales. Ademas tomaron muestras de los cuerpos desecados Maria y Wawita al mismo tiempo. El equipo de Gaia-Tercer Milenio, comenzó su exploración del ADN de los cuerpos desecados con un análisis de ADN huella genética o análisis de ADN autosomico de un hueso del cuerpo desecado de 1.69 cm denominado Maria en el Instituto de Medicina y Genomica de Mexico el 22 de Mayo de 2017.

En la muestra de la cabeza suelta (cerebro), el análisis de los alelos obtenidos, y su comparación con los alelos del sistema genético, no existe correspondencia de 10 locis obtenidos con 13 locis del sistema genético. En el caso de los resultados del cerebro la duda se imponía ya que no amplificaron dos locis. Ante la disyuntiva que fue la no amplificacion de dos marcadores CODIS la no correspondencia con el ADN humano, en la muestra del cerebro( proveniente de la cabeza suelta), se decidió no continuar análisis profundos de ADN con material proveniente de esta muestra y recoger nuevas muestras de tejido y huesos provenientes del cuerpo desecado completo Victoria sin cabeza de 60 cm.

 

Cabe aclarar que estos test de ADN exploratorios están basados en el análisis de SNPs de las muestras problema y su comparación con los loci (13-20 locis) de homo sapiens identificados y situados en varios cromosomas humanos, administrados en la base CODIS administrada por el FBI. El fundamento teórico para este tipo de análisis de ADN se basa en que se conoce que las regiones flanqueantes de un microsatélite SNPs, incluso sin repeticiones en tándem, son bastante variables; su ADN no codificante no esta sujeto a selección. La replicación no es aleatoria, asi podemos encontrar fragmentos mantenidos dentro de una especie, o al menos compartidos por la mayoría de sus individuos.

En una especie dada, se pueden definir secuencias específicas corriente arriba y corriente abajo del microsatélite SNPs para la amplificación por PCR. Los kits utilizados por los laboratorios forenses de análisis de ADN están diseñados para el estudio de muestras « humanas ». Por esta razón, no funcionan para genotipar a primates o chimpancés.Es muy importante dejar en claro este aspecto de este test de ADN preliminar. Esto se basa en el principio que los cebadores son suficientemente específicos para cada especie para realizar la amplificación en presencia de contaminación por ADN de otras especies en proporciones razonables.

 

Partiendo del presupuesto lógico que las muestras de campo están frecuentemente contaminadas con varias bacterias u hongos; Este tipo de análisis fue una buena opción preliminar, en una fase exploratoria. Los kits se pueden utilizar de forma rutinaria en el ADN extraído a bajo costo, en las propias muestras. En los análisis preliminares solo se trata de amplificar un fragmento pequeño en particular de pocos cientos de bases. Se parte del hecho que este ADN esta degradado y fragmentado. A pesar de estas restricciones, el Instituto de Medicina y Genomica de Mexico obtuvo resultados del ADN contenido en un hueso de Maria. El análisis de los alelos obtenidos y comparados con los alelos de 13 loci CODIS para homo sapiens, en la muestra Maria, arrojo como resultado tres no amplificaciones (N.A) y amplificaron de alelos en 8 locis o marcadores CODIS. Después de comparación de los alelos obtenidos con los alelos humanos de referencia en el sistema genético no existe correspondencia con la base Codis para Maria. Plausiblemente, en base a este resultado; Se formulo la hipótesis de trabajo: Maria no pertenece a la especie homo sapiens.

 

En mis programas de divulgación y educación, como persona independiente a los equipos, formule mi opinion de la importancia de volver a efectuar otro análisis de huella autosomica con muestras de Maria para determinar las posibles causas de la no amplificación de los loci VWA y D21S11: (https://www.youtube.com/watch?v=wx96sBnTDuE).

 

 

Hay que decir, que un perfil genético no tiene la robustez estadística de una secuenciacion masiva de ADN. Estos análisis solo permiten descartar la pertenencia o no pertenencia a homo sapiens en las regiones SPNs del ADN de la muestra analizada.

El perfil autosomico como analisis de ADN exploratorio, sirve como guía para futuros análisis de ADN en profundidad como son las secuenciaciones masivas de ADN nuclear.

 

El equipo de Tercer Milenio-Gaia a continuación de los resultados obtenidos del perfil genético de Maria emprendió un análisis de secuenciacion masiva de ADN en el laboratorio BioteCmol de la ciudad de Mexico bajo la responsabilidad del Biólogo molécular de la UNAM; Ricardo Rangel para analizar en profundidad las diferencias del genoma de el cuerpo desecado Maria y de los cuerpos desecados de 60 cm (Victoria) con el genoma de homo sapiens.

 

Para ellos se baso en muestras tomadas directamente en los cuerpos de Maria y de Victoria. Hay que aclarar, que la utilización de un análisis exploratorio SPNs « huella autosomica » se justifica desde varios puntos de vista:

 

i.- La facilidad de realizarles ya que muchos laboratorios alrededor del mundo ofrecen estos servicios. Estos análisis brindaron la posibilidad a los equipos de Tercer Milenio-Gaia e Inkari de tomar muestras en doble ciego y efectuar los mismos tipos de análisis de ADN en laboratorios diferentes situados en países diferentes como se vera mas detalladamente en este informe.

ii.- Ademas estos análisis son baratos, están estandardizados son de rápida duración. En esta investigación, ellos brindaron, las respuestas básicas a las preguntas básicas tales como: a.- Existía ADN explotable? b.-Cual era la calidad del ADN contenida en las muestras.

iii.- Estos análisis exploratorios mostraron la factibilidad de realizar una exploración profunda del genoma de los cuerpos desecados mediante la secuenciacion masiva del ADN de los cuerpos desecados.

 

Entrando de esta manera a la fase posterior de los análisis de ADN. Los equipos de Tercer Milenio y Gaia la llevaron a cabo en simultáneo secuenciaciones masivas de ADN nuclear estableciendo a su interior un doble ciego en lo que compete las muestras de Maria y Victoria entre los laboratorios BioTecmol de Mexico; Cen4 GEN (ABRAXAS) y la Universidad Federal de San Petersburgo de Rusia.

La Universidad de San Petersburgo analizo ademas muestras del cuerpo desecado Wawita que BioTecmol no lo realizo.

 

Trabajo exploratorio ONG Instituto Inkari-Cuzco.

 

Médicos Peruanos colaboraron con Inkari y extrajeron dos muestras:

i.- Una proveniente de una cabeza suelta, que presumiblemente perteneció a un ser de 60 cm ( pero también cabía la posibilidad que esta cabeza suelta podría ser armada, sola sin cuerpo a partir de material antiguo humano, siguiendo la técnica chinchorros).

 

Teniendo en cuenta los resultados arrojados por el analisis de ADN mitocondrial de la cabeza suelta en Lakehead University Paleo DNA que dan una correspondencia de 100% de la misma con ADN de homo sapiens (con una antiguedad verificada con radio isotopo C14 por tres laboratorios de 1010 +-30 BP); y teniendo en cuenta los resultados de las secuenciaciones masivas nucleares de BioTecmol de 19.82% de correspondencia del cuerpo de Victoria con el ADN humano y ratificado con los resultados de Cen4GEN   analizados por ABRAXAS que arrojan 15.25% como valor maximo de correspondencia del ADN de Victoria con todas las especies contrastadas en NCBI, actualmente se puede descartar que la cabeza suelta no corresponde a Victoria de manera contundente.

 

Por esta razón, no se puede partir del supuesto que analizando el material contenido en ella se este analizando a un material proveniente de un cuerpo desecado tridactilo de 60 cm como Josefina o Albert o la familia. Este metodo de extrapolacion no hace parte del metodo cientifico.Cabe aclarar que la apariencia de presentar una similitud con las cabezas de los cuerpos completos tridactilos no esta basado mas que una apariencia. Este es un criterio no objetivo. 

 

ii.- Se tomaron muestras de piel y hueso de una mano tridactila gigante suelta. El Instituto Inkari procedió a enviar a analizar estas muestras a Lakehead University-PALEO-DNA del Canada. El Instituto Inkari envio replicas de estas muestras a Tercer Milenio-Gaia para cumplir con una cadena de custodia.

 

Inkari en mayo 2017 para abordar las hipótesis antes mencionadas, procedió a efectuar dos análisis exploratorios para identificar la existencia de ADN explotable en dos muestras. 1.- Una grande mano tridactila suelta sin cuerpo 2.- Material biológico (posible cerebro) extraído de una cabeza suelta con apariencia semejante a las cabezas de los seres desecados de 60 cm completos que se encontraron posiblemente en el mismo lugar.

 

El instituto Inkari realizo un segundo análisis exploratorio de ADN mitocondrial en el laboratorio de LAKEHEAD UNIVERSITY-PALEO-DNA para explorar el origen de las muestras y verificar la valide de sus primeros analisis.

 

Llegados a este punto de la investigación, el instituto Inkari, se centro fundamentalmente en los análisis de ADN exploratorios por huella autosomica de Maria, en el laboratorio LAKEHEAD UNIVERSITY-PALEO-DNA. Se efectuo un análisis de ADN de huella autosomica para verificar las correspondencias entre el pie, la mano y las vértebras de Maria. Este análisis se realizo para responder a la pregunta: Maria es un cuerpo armado?

El instituto Inkari permitio la toma de muestras de Maria y Wawita al Sr Steve Mera quien en primera instancia informo que los analisis de perfil autosomico serian efectuados en un laboratorio de Inglaterra. Finalmente estos fueron efectuados en Sri Lanka en el laboratorio Genetech.

La comparación de los resultados del laboratorio Genetech de Sri Lanka obtenidos con la muestra de Maria comparados con los resultados obtenidos por el Instituto genomico de Mexico para Maria muestran cercanía en los mismos. Sin embargo es imposible concluir dado a la cantidad de alelos provenientes de contaminacion exogena que se presentan en los analisis del laboratorio Genetech.

Cabria preguntarse el porque de esta degradacion si se trata del mismo tipo de analisis precticado a el mismo cuerpo desecado (Maria) a 12 meses de intervalo? Talvez esto muestra que el cuerpo se esta degradando de manera rapida.  Esta situacion es importancia capital para estudios posteriores y por esto la menciono.

No se comparo los resultados de los análisis de huella cromosómica de Wawita del laboratorio Genetech porque el perfil autosomico no se pudo obtener por la degradacion del material. Para el análisis de perfil autosomico para Maria en ambos laboratorios, el ADN obtenido no es coincidente con homo sapiens según los criterios de comparación empleados en CODIS. En los dos casos no existen 13 loci correspondientes de 13 locis CODIS analizados para homo sapiens. Cabe aclarar; para que exista correspondencia con homo sapiens se necesita que los trece locis analizados correspondan.

 

En los últimos análisis de huella autosomica del instituto Inkari efectuados por LAKEHEAD UNIVERSITY- PALEO-DNA Laboratory para comparar los alelos obtenidos de la palma de la mano de Maria, del dedo del pie de Maria, y las vértebras de Maria en los perfiles genéticos obtenidos. Se observaron ADN parcialmente coincidentes entre la mano y el pie con 15 alelos coincidentes, los alelos de las vertebras y la mano presentaron 16 alelos coincidentes y las vertebras y el dedo del pie presentaron 19 coincidencias. El total de Marcadores con alelos CODIS analizados fue de 20.

 

Como lo manifeste antes, estos resultados no son concluyentes pero son cercanos entre si. Ellos son parcialmente coincidentes. Esto sugiere que el ADN de Maria, podría estar contaminado no solo por bacterias, virus u otros genomas contaminantes. Lo que es bastante común en el pasado. Como se trata de un análisis de perfil genético (huella genética) este tipo de análisis de ADN no tiene la capacidad de reparar el ADN y asi resolver este tipo de situaciones técnicas.

 

Con respecto al perfil genético de Maria y la unidad genética sobre la base de tales resultados es bastante difícil y peligroso ser concluyente si se compran estos análisis con los del instituto genomico de Mexico. Ahora si se comparan los alelos de cada parte del cuerpo de Maria con los alelos CODIS para homo sapiens se puede decir que no existe coincidencia con los alelos del ADN humano de ninguna parte del cuerpo de Maria aunque entre si existen correspondencias parciales.

 

María está ciertamente contaminada por genomas bacterianos / virus pero también por los genomas humanos, como lo sugiere la presencia inconsistente del gen de la amelogenina (AMEL), el marcador utilizado como herramienta rutinaria del análisis forense de ADN para determinar el género. Sin embargo, hay que tener en cuenta que esta interpretación se basa en el supuesto de que el genoma de Maria es homo sapiens (que tiene el gen de la amelogenina en el cromosoma Y), que es solo un postulado que será probado más tarde. Por las razones antes mencionadas, es imposible establecer una base genética clara y confiable en este perfil genético con los análisis de Paleo ADN. Especialmente, si estas criaturas han sido construidas con restos humanos y / o animales, entonces los análisis de ADN deben mostrar, después de eliminación de ADN contaminante:

 

(i) ya sea ADN 100% moderno homo sapiens 

(ii) o parcialmente moderno homo sapiens y parcialmente animal, probablemente presente en los locales en el Perú.

Llegados a este punto en la exploración del ADN de los cuerpos desecados, se debe decir que los únicos análisis realizados hasta en momento y que podrían confirmar el interés que merece el caso de María, o de los cuerpos desecados de 60 cm desde un punto de vista biológico, son las secuenciación masivas y análisis bioinformático realizados BioTecmol (Tercer Milenio-Gaia), Secuenciacion de un hueso de Maria del instituto Inkari por la PhD. Sarah Kouhou; secuenciacion nuclear por Cen4GEN (ABRAXAS) y la secuenciacion masiva de exones realizada por la organización federal de investigación, Instituto Medico Genético San Petersburgo mediante secuenciacion de ADN nuclear.

 

Estos análisis de secuenciaciones de ADN nuclear confirman con un valor promedio de 30.82% ( valores cercanos obtenidos entre los tres análisis), la no correspondencia de las secuencias de ADN provenientes de Maria con homo sapiens. Tambien las secuenciaciones masivas nucleares confirman que Victoria no tiene una correspondencia con el ADN humano y su correspondencia con las especies conocidas en el planeta y contenidas en la base NCBI est de solo 15.25%.

 

Cabria también decir que algunos de estos análisis de ADN llevados a cabo por los diversos equipos, no se pueden comparar entre si muchos de ellos aunque ellos sean practicados a los mismos cuerpos desecados, porque las técnicas de análisis de ADN difieren.

Por ejemplo; Con los resultados de huella de autosomas efectuados para de la palma de la mano derecha de Maria, del dedo del pie izquierdo de Maria y una vértebra de Maria realizados en LAKEHEAD UNIVERSITY PALEO DNA Canada por pedido de Inkari y los estudios de comparación entre manos, pies y cuerpo de Maria por la Universidad Federal de San Petersburgo ya que ellos no son comparables entre si por aplicarse tecnologías de ADN diferentes.

 

 

VIII.- RESULTADOS

 

Resultados de análisis de ADN mitocondrial y análisis del cromosoma Y LAKEHEAD University PALEO_DNA_CANADA:

 

Las regiones analizadas del genoma mitocondrial para las dos muestras fueron

16024-16365 bp, 73-340 bp de las regiones 1 hipervariable (HV1) y region 2(HV2).

 

Para el tejido extraído de la cabeza (cerebro); de la region 12s del genoma mitocondrial no se obtuvieron secuencias analizables.

 

Para la region 16s del genoma mitocondrial en la muestra del cerebro se se obtuvieron secuencias de ADN mitocondrial que fueron contrastadas con la Base BLAST obteniendo un porcentaje de 100% de correspondencia de la secuencia analizada con el ADN de la especie homo sapiens.

 

Para la muestra de la grande mano tridactila, se obtuvo una secuencia. El laboratorio hace resaltar que esta muestra contiene deterioración en su ADN. Esta secuencia comparada con la base de datos Blast(1) corresponde a 99% a con homo sapiens con una diferencia de 1%.

 

Nota (1): BLAST (http: blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) es la herramienta bioinformatica mas utilizada en todo el mundo. Ella permite la comparación de una secuencia problema(query sequence) de nucleotidos o de proteínas con todas las secuencias de una BD para encontrar regiones de similitud local.

 

Ademas, calcula la significación estadística de los resultados. En los resultados de ADN mitocondrial el laboratorio informa que el origen de de estas muestras es de medio oriente o Europa del Este ( origen parecido a el resultado de haplogrupos encontrados por el Dr. Brien Foester para los llamados cráneos de paracas). Con base a estos resultados para estas muestras, la PhD Sarah Kouhou se puso en contacto con Paleo-DNA para pedir los "folders" fastq obteniendo resultados bastante diferentes.

 

En el análisis del gen amelogenin, ambas muestras provienen de individuos de sexo masculino.Estos resultados corresponden como se ha mencionado antes a tejido y hueso extraído de una grande mano tridactila (con antigüedad datada con C14 en 7270 BP la piel de la mano y a 1080 BP el hueso de la mano. Laboratorio GTCA Puerto Rico) y a tejido extraído de una cabeza suelta ( posiblemente cerebro) con una antigüedad de 1010 BP GTCA Puerto Rico.

 

Ademas en el análisis de ADN del cromosoma Y en el laboratorio LAKEHEAD UNIVERSITY- PALEO-DNA para estas dos mismas piezas se confirma una vez mas, su sexo masculino y se verifica de nuevo el haplotipo "Q" que pertenece en 95% a etnias ancestrales de las poblaciones originarias de America con algunas expresiones en Asia y Europa de este haplotipo.

 

El laboratorio informa que no existen bases de datos de etnias igualmente antiguas para poder comparar este resultado. En los últimos exámenes de ADN mitocondrial se obtuvo para la cabeza suelta (cerebro) un Haplogrupo predictivo: HV2 o B2a. Para la grande mano tridactila el haplogrupo predictivo fue U8a,L3,S. El Informe LAKEHEAD UNIVERSITY PALEO-DNA LABORATOR (Pavö) avanza una explicación para los haplogrupos encontrados en las muestras diciendo:

 

El haplogrupo de ADN mitocondrial HV se originó hace 25,000 a 30,000 años en el Cercano Oriente o el Cáucaso. Los miembros de este haplogrupo se movieron hacia el norte a través del montañas del Cáucaso desde el Cercano Oriente y el oeste a través de Anatolia (El linaje fue llevado a Europa por primera vez por el Cro-Magnon, posiblemente este evento marcó el principio del fin de la era de los Neandertales.

 

Estos Cro-Magnon de HV de haplogrupo de Magnon pudieron superar a los residentes Neandertales para recursos escasos debido a sus mejores habilidades de comunicación, armas, y el ingenio. Se cree que el haplogrupo B de ADN mitocondrial ha surgido alrededor de 60,000 años. Este grupo probablemente surgió en las planicies altas de Asia Central entre el Mar Caspio y el Lago Baykal. Actualmente, el haplogrupo B se encuentra en una frecuencia de alrededor del 17% en el sudeste asiático, y representa alrededor del 20% de toda China.

 

Es uno de los cinco haplogrupos de ADNmt encontrados en los pueblos indígenas de las Américas. El haplogrupo U apareció por primera vez hace unos 55,000 a 60,000 años. Tiene una distribución geográfica extremadamente amplia que abarca desde Europa y Norte del África a la India y Asia Central.

 

Aunque algunos miembros de haplogrupo U emigraron al norte hacia Escandinavia y otros se mudaron al sur hacia el norte de África, la mayoría de los miembros de haplogrupo U provienen de un grupo que se movió hacia el norte desde el cercano Oriente, cruzando las escarpadas montañas del Cáucaso en el sur de Rusia y moviéndose a las estepas del mar negro. Los haplogrupos L son conocidos como las ramas más profundas del Arbol de ADN mitocondrial. A medida que descendían de la hembra común y ancestro a toda la especie humana los grupos se encuentran exclusivamente en África.

 

Dado que todos los humanos tienen una hembra ancestro común "Eva", y porque los datos genéticos actuales muestran que los africanos son los grupos más antiguos del planeta, se acepta que nuestra especie se originó allí. El haplogrupo S mitocondrial es un descendiente del macrohaplogrupo N. Tiene una ancha distribución a través de Australia. S se encuentra comúnmente en los aborígenes australianos.

 

Participación de la Universidad Federal de San Petersburgo-Rusia.

 

La participación de la Universidad federal de San Petersburgo se da en un convenio con la cadena productora audiovisual Americana Gaia TV. La toma de muestras de los cuerpos desecados Maria y Wawita por parte del equipo de la Universidad de San Petersburgo Rusia fue realizada por por el Biofisico Ph.D Konstantin Korotkov en el momento de la presentación de estos dos cuerpos en Palpa.  

 

La medica radióloga rusa, Natalia Zaloznaya analizo las tomografías y radiografías de los cuerpos, efectuadas por el Dr. Radiólogo Raymundo Salas Alfaro dando su certificación de la no existencia de cortes o manipulación detectable en ellas.  

 

Los científicos rusos de la Universidad de San Petersburgo, del instituto de genética molecular bajo la dirección del PhD / Rusia Oleg Sergeevich Gotov, realizaron una secuenciacion masiva de exones para los cuerpos desecados en el laboratorio del Instituto de Medicina Genomica para Maria y Wawita.  Los resultados de los análisis de ADN presentados por Gaia, informan que Maria tiene una similitud de 23.8% con el ADN de homo sapiens y Wawita una similitud de 25.6% con el ADN de homo sapiens.

 

En el caso de Maria se encontro 76.2% de no correspondencia de su ADN con homo sapiens, Para Wawita la no correspondencia con al ADN de homo sapiens fue de 74.4%. 

 

El PhD Konstantin Korotkov informo, que continúan en la búsqueda de comparaciones genéticas con el ADN de pueblos originarios y ancestrales del Peru.  

 

IX.-ANALIS DE RESULTADOS

 

Es necesario decir que el instituto Inkari con base a los resultados emitidos por el laboratorio LAKEHEAD UNIVERSITY-PALEO-DNA del material proveniente del cráneo de la cabeza suelta, (posible cerebro) y de la grande mano tridactila podría explorar con estudios multidisciplinarios la posibilidad que la grande mano y la cabeza suelta correspondan a piezas antiguas esculpidas a partir de craneos completos (caso de la cabeza) o armadas por los antiguos habitantes de la region de Nazca-Palpa con una técnica similar a la chinchorro.

Es claro que habría que verificar antes, si estas piezas se encontraron en el mismo recinto que los cuerpos desecados tridactilos de 60 cm y Maria y Wawita; En el caso afirmativo, esto abriría la posibilidad que ellas sean parte de una practica cultural a investigar por las disciplinas que le son propias.

 

i.- Esta afirmación se apoyaría en que que la antigüedad de la grande mano esta datada por Beta Analytic USA laboratorios en 7000 BP de antigüedad para C14 y en 7270 BP la piel de la mano y 1080 BP el hueso de la mano por el laboratorio GTCA Puerto Rico) y el tejido extraído de una cabeza suelta ( posiblemente cerebro) con una antigüedad de 1010 +-20 BP GTCA Puerto Rico. Como puede verse no se trata de material reciente, es un material con antigüedad.

 

ii.-En caso de que el instituto Inkari decida llevar a cabo mas estudios con este material, seria recomendable que realice el mismo estudio de ADN mitocondrial y análisis del cromosoma Y en otro laboratorio para poder contrastar los resultados obtenidos.

 

iii.-Cabria mencionar también que según se desprende de las secuencias preliminares, obtenidas por el equipo del instituto Marx Planck de Alemania, para la comparación entre Neardental y H. sapiens por ejemplo los pares de bases de las dos especies son iguales en un 99.7%; la proporción es del 98.8% entre H. sapiens y los chimpancés. Para discriminar al máximo las diferencias entre genomas es recomendable recurrir a secuenciaciones masivas nucleares del material analizado.

 

Con el resultado de 99% de correspondencia con el ADN mitocondrial obtenido para la grande mano tridactila no puede descartarse tajantemente que este ADN obtenido no pertenezca a un ser primate emparentado con el humano. Esta situacion se vislumbra ya que Cen4GEN y ABRAXAS secuenciaron la mano grande suelta obteniendo 97% de correspondencia con el genoma humano.

 

iv.-El estudio de la grande mano tridactila, el Instituto Inkari, no la ha descartado y por esta razón en una fase posterior la Ph.D Sarah Kouhou analizo su ADN con una secuenciacion masiva en el laboratorio BioTecmol. En el análisis de ADN practicado por la Ph.D Sarah Kouhou para la grande mano tridactila ella informa que su ADN se pudo amplificar. Se espera resultados de esta secuencia.

 

v.- El análisis efectuado para el instituto Inkari por la Ph.D Sarah Kouhou fué un análisis de secuenciacion masiva de ADN nuclear de Maria. La secuenciacion masiva se llevo a cabo en el laboratorio BioTecmol de Mexico.

 

La secuenciacion y análisis bioinformático arrojo que las secuencias de ADN de Maria tiene una alineación de 33.675% con el genoma de homo sapiens. La PhD. Sarah Kouhou realizo alineaciones con diferentes especies y genomas de contaminantes para discriminar que el 66.3225 % no es correspondiente del genoma de Maria con el genoma de homo sapiens. Obteniendo asi que 18.415% del genoma de Maria corresponde a genomas bacterianos y otros genomas. La parte desconocida del genoma de Maria es de 47.907%.

 

Con base en los resultados del informe de la Ph.D Sarah Kouhou, y en los resultados de BioTecmol la presencia de secuencias no asignadas o no clasificadas en una muestra de tejido única excluiría, la hipótesis de que María podría estar formada por los restos de momias peruanas (homo sapiens), o establecido artificialmente / quirúrgicamente.

 

Aunque esta última hipótesis sería aún muy difícil de demostrar debido a que se requiere un altísimo nivel de biotecnología para manipular el ADN de estos cuerpos desecados y obtener asi los resultados coherentes encontrados a este particular en las tres secuenciaciones masivas realizadas por los laboratorios; BioTecmol (Mexico) y la organización federal de investigación, Instituto Medico Genético San Petersburgo. Cabria también decir que ambos centros son especializados en genética molecular y su calidad de trabajo en la tecnología del ADN con normas esta garantizada por las normas ISO.

 

La PhD, Sarah Kouhou en su informe a Inkari dice: Ante las preguntas como cual es la autenticidad y naturaleza de las criaturas? ¿Son estos seres auténticas criaturas biológicas o solo un arreglo refinado de otras especies ya conocidas animal o humano? Definitivamente ha sido la pregunta inmediata planteada por personas que se han acercado al material, Y ciertamente por el público.

 

Antes de discutir esta pregunta, se deben tener en cuenta dos puntos: El primer punto es que en la ciencia, cuando se plantea una hipótesis, el primer paso consiste en revisar su supuestos e implicaciones y verificar si son consistentes con la evidencia disponible. Si esta etapa previa tiene éxito, luego, un segundo paso consiste en probar las predicciones de tal hipótesis.

 

(i) Estos cuerpos tienen 1600 y 6500 años de antigüedad, respectivamente. Los tejidos están secos, duros y tienden a desmoronarse. En consecuencia, las intervenciones quirúrgicas eventuales no pueden haberse realizado recientemente, sino más bien a la muerte de los sujetos, es decir, hace más de 1600 años para María, y hace más de 6000 años para la grande mano tridactila. Entonces, ¿qué tan probable es la hipótesis de un "arreglo refinado de otras especies ya conocidas, animales o humanos »?

 

Esta hipótesis implica la existencia de rastros (lesiones, cicatrices) que deben ser visibles, ya que no hay cicatrices después de la muerte. También una practica asi asume ciertos niveles de tecnología y conocimiento que se requieren para producir tales individuos. Las cuidadosas observaciones anatómicas, incluidas las tomografías computarizadas de 128 cortes, revelaron ser particularmente realistas y refinadas en detalles como (huellas dactilares, dientes adultos, superficie externa e interna del cráneo, incluidas suturas, piel, vértebras, costillas, articulaciones y articulaciones, aparentemente órganos internos). Además, no hay lesiones en los huesos ni en los tejidos de la piel, lo que sugiere que una cirugía no se pudo detectar. Como tal, la hipótesis mencionada parece poco probable debido a:

 

(i) la ausencia de evidencia que sugiera cirugía o manipulación similar

(ii) los detalles anatómicos que requerirían, para ser emulados, medios tecnológicos a priori no disponibles en ese momento e incluso hoy en día.

(iii) la presencia de otro individuo, un bebé(Wawita), que se encontró en el mismo sitio y mostró el mismo carácter atípico con características como Maria. Detalles tales como las proporciones del cuerpo y la cabeza confirman que este es un bebé genuino, y no un adulto de pequeño tamaño. Sin embargo los ultimos resultados de las mismas tomografias efectuadas por el radiologo Raymundo Salas Alfaro han puesto en evidencia que los dedos de manos y pies de Wawita fueron mutilados puesto tenia a la base 5 dedos en manos y pies. Esta situacion es problematica ya que los analisis de ADN de Wawita muestran que ella tiene en su ADN una cercania con Maria (25.3% de ADN semejante con homo sapiens)por lo tanto no tiene una correspondencia con homo sapiens. Parece evidente que teniendo en cuenta el estado de casi descomposicion de los huesos este cuerpo no ha podido ser manipulado modernamente. Seria importante profundizar en el futuro en estas interrogantes.

 

Una objeción recurrente ha sido que las lesiones o cicatrices pueden ser tan sutiles que podríamos haberlas omitido. Las nuevas tomografias resuelven esta interrogante. Efectivamente, la resolución de los escáneres utilizados permitió ver muchos detalles refinados, pero no fue la más alta disponible en el mercado. Sin embargo, esta objeción todavía presupone un nivel de tecnología y ciencia incompatible con el calendario evocado por los análisis de radiocarbono, y me gustaría llamar su atención sobre hacia dónde conduce esta hipótesis.

 

Qué dispositivos o herramientas de cirugía antiguas podrían haber podido operar de una manera tan sutil como nuestros escáneres modernos? ¿Se perderían las huellas dejadas en el cuerpo? ¿Podemos asumir razonablemente la existencia de un laboratorio de biotecnología de vanguardia hace 1000 BP? A donde están los vestigios de instalaciones de este tipo en el desierto de Nazca datados ( si los existen) entre 1600 y 6500 años?. Esto es simplemente sin sentido, o al menos no es compatible con la evidencia disponible.

 

Tampoco a nivel de análisis de radio imagen y escáners la hipótesis de que María podría ser fabricada con los restos de momias peruanas (homo sapiens), o establecido artificialmente / quirúrgicamente es fácil de demostrar ya que se requeriría un conocimiento de alto nivel medico-anatómico para lograr la correspondencia con los datos anatómicos sin cicatriz, sin rastros de lesiones de ningún tipo que puedan ser indefectibles en los análisis efectuados por la Dra radióloga Jessy de USA , la Dra Natalia Zaloznaya medica radióloga y el medico radiólogo peruano Raymundo Salas Alfaro, que analizaron las tomografías y radiografías de los cuerpos, dando su certificación de la no existencia de cortes o manipulación detectable en ellas. En este momento, cabria la pregunta: Como lograrían simples escarbadores de tumbas realizar esta proeza científica?

 

 

 X.-ESTADO ACTUAL DE LA INVESTIGACION

 

Una vez terminada esta fase exploratoria, los tres equipos optaron por proseguir los análisis de ADN en profundidad con secuenciaciones masivas , cada uno por separado estableciendo de esta manera una cadena de custodia.

 

Actualmente, el equipo de Tercer Milenio-Gaia continua completando la secuenciacion masiva de Maria. El equipo de Tercer Milenio-Gaia realizo una secuenciacion masiva de ADN nuclear en el laboratorio de biologia molecular Cen4GEN del Canada para Victoria que fue completada con el analisis bioinformatico por ABRAXAS arrojando claramente el resultado que Victoria tiene una correspondencia de solamente 15.25% con todos los genomas contenidos en la biblioteca NCBI. En lo concerniente a su correspondencia con el genoma de homo sapiens Victoria solo tiene una correspondencia de 9%. Este resultado permite profilar la posibilidad de encontrarnos ante una nueva especie vertebrada desconocida hasta la actualidad que no comparte ADN de manera significativa con ningun vertebrado terrestre.

 

La Universidad Federal de Saint Petersburgo-Rusia esta realizando una secuenciacion masiva de exones (secuencias de ADN que codifican proteínas)para los cuerpos desecados tridactilos de 60 cm y se esperan resultados.

 

Inkari a realizado una secuenciacion masiva de Maria con la dirección de la Ph.D Sarah Kouhou en BioTecmol(Mexico) y ella informa que aun se esta completando aun secuencias del genoma de Maria.

 

Nunca se ha perdido de vista que desde el inicio de esta investigación se ha tratado de responder con el método científico a las preguntas básicas como:

i.-La autenticidad de los cuerpos desecados

ii.-Su eventual relación o similitud con homo sapiens

iii.-Sus orígenes.

 

No se ha encontrado ninguna evidencia que sugiera que se trate de cuerpos falsos o quirúrgicos. El siguiente seria un conjunto de pruebas:

 

(i) En la revisión profunda de los detalles anatómicos sutiles (articulaciones, tejidos de la piel, superficie interna del cráneo, suturas craneales, huesos).gradiente de densidad, órganos internos, huellas dactilares se observa la ausencia ( a parte de Wawita), de cicatrices o cualquier lesión mecánica o quirúrgica detectada en los tejidos de estos espécimenes.

(ii) La presencia de secuencias no Homo sapiens mayoritarias , bacterianas / contaminantes encontradas en las mismas muestras analizadas por los laboratorios por secuenciaciones masivas y comparables entre ellas .

(iv) El hecho de que no se encontró ADN animal  de los animales avanzados como posibles fuentes de el montaje(varias especies locales analizadas)

(v) El hecho de que las secuencias modernas de ADN humano estaban presentes en un porcentaje menor en el caso del analisis de Maria.

(vi) La presencia de un bebé similar pequeño encontrado en el mismo sitio, con las mismas características atípicas sugiere que podríamos estar en presencia de especies biológicamente indefinidas, tal vez cerca de nuestra especie y que merece más investigaciones.

Llegados a este punto, podríamos decir que se esbozan algunas posibles respuestas a preguntas como:

 

Es un fraude este caso?

 

Hay evidencias provenientes de análisis científicos de diverso tipo que permiten inferir que no. Porque? Todos los análisis de ADN de diverso tipo y profundidad practicados hasta el día de hoy tanto a los cuerpos tridactilos desecados de 60 cm como a Maria y Wawita ratifican uno detrás de otro que se trata de entidades con un ADN que le es propio y ademas bien diferenciado con el ADN de homo sapiens.

 

La baja correspondencia del ADN de estas entidades con el ADN humano no superior a 34% en el mejor de los casos; permite explorar la posibilidad de encontrarnos frente a especies desconocidas y no clasificadas en el árbol filogenético de las especies.

 

Llegados a este punto es pertinente decir que no se puede tratar este descubrimiento como un descubrimiento clasicamente arqueologico ya que se esta demostrando con los resultados de ADN de los laboratorios que realizaron secuenciaciones masivas que no se tratan de homo sapiens por lo tanto buscar fardos funerarios o objetos de orden arqueologico asi como exigir la existencia de un sitio arqueologico segun los protocolos del ministerio de cultura en caso de culturas humanas ancestrales no esta en relacion con la naturaleza no humana de estos cuerpos.

 

Esto equivaldria a pedir a un botanista que encuentre una nueva especie vegetal protocolos arqueologicos o a un ornitologo protocolos y fardos funerarios para poder entrar a estudiar su descubrimiento. Por esta razon,  yo persisto en emplear el termino cuerpos desecados tridactilos ya que el termino "momias" se presta a polemicas corporatistas en el terreno arqueologico.  

 

Existen dos posibles especies diferentes?

 

A nivel morfológico y de análisis radiológicos y tomograficos se observan grandes diferencias fenotipicas entre los dos tipos de cuerpos tridactilos desecados. De hecho, Los especimes denominados, Josefina, Victoria y Albert poseen una talla de aproximadamente 60 cm y Maria tiene una talla de 1.70 cm. Poseen entre si, la característica de tener manos y pies tridactilos.

 

Sin embargo la respuesta mas detallada la da el analisis de ADN. Son dos posibles especies con ADN diferente y todavia no se han realizado estudios comparativos entre ellas para ver si existe una correspondencia entre su ADN  ya que solamente se han comparado ambas con el ADN humano y con el de otras especies terrestres.

 

Una situación importante es el hecho que los análisis genotipicos (ADN) están en concordancia hasta el momento en la mayoría de casos con los estudios morfológicos realizados por el Dr. Jose Zalce Benitez y el biologo Jose de la Cruz Rios Lopez y con los medicos Rusos. Si bien, existen indices para explorar en la dirección de estar frente a dos especies diferentes en base a la diferencia de resultados arrojados por Maria y Victoria sin embargo faltan aun mas resultados y estudios filogeneticos para poder responder afirmativamente a esta pregunta.

 

La proximidad genética entre Wawita y Maria se vislumbra con los resultados de ADN obtenidos en la Universidad Federal de Saint Petersburgo-Rusia, para Maria con 23.8% de correspondencia de su ADN con el humano y para Wawita con el 25.6% de correspondencia con el ADN humano. Pero el hecho que se encontro una mutilacion con las nuevas tomografias complica pronunciarse sobre la cercania filogenetica entre Maria y wawita.

 

Los cuerpos desecados pertenecen a la especie humana?

 

Según los resultados de ADN de huella autosomica y profundizados con el estudio de ADN masivo estos cuerpos desecados no pertenecen a la especie humana.

 

Responder a esta pregunta fue primordial. Esta investigación desde su inicio y por razones diversas que no son el objeto de este trabajo, ha suscitado perspicacias. En ocasiones para desvirtuar este caso, se ha llegado a afirmar que estos cuerpos fueron armados de momias pre-incaicas mutiladas para dar la apariencia que hoy presentan estos cuerpos. Esta situación (en el caso de haberse verificado esta hipótesis) hubiese colocado en una situación difícil esta investigación. No sin razón, esto hubiese justificado reticencias preliminares de algunos científicos peruanos que se negaron públicamente a entrar en materia, aduciendo la posible existencia de un delito. Situación comprensible. Pero en la actualidad con los resultados obtenidos hasta el presente se puede decir que los análisis de ADN y otros análisis científicos muestran que este no es el caso.

Nada mas facil que las instituciones peruanas de manera oficial pidan a los laboratorios que han realizado las secuenciaciones masivas de ADN nuclear los resultados y esto les garantisaria la seriedad de los resultados por un conducto directo para poderse pronunciar de manera objetiva. Es importante abrir un dialogo para que científicos y funcionarios del ministerio de cultura exploren en profundidad el caso en beneficio del Peru, país a donde se dio este hallazgo.

 

Es lógico, que serian los cientificos peruanos que con sus estudios y análisis científicos los que oficialmente publiquen los resultados de la investigación final en las revistas especializadas. Seria importante que ellos tengan absceso a los cuerpos para analizar con estudios similares o mas profundos la idoneidad del caso.

 

También es relevante en estado actual a donde se encuentra esta investigación, con pruebas avaladas por una universidad federal estatal de prestigio mundial y varios laboratorios privados de diferentes países de reconocida prestancia, con análisis de ADN, con suficiente material de ultima generación a nivel de escáneres HD, de 128 con cortes realizados en 2018 entre otros resultados, que científicos peruanos y de todo el mundo, no se alejen y al contrario participen con su experiencia.

 

A la comunidad científica no se le pide que crea ya que esto seria una falta de respeto para su inteligencia, se pide que solo investiguen por ellos mismos para ratificar o inferir la validez de este estudio.

 

 

XI.- CONCLUSIONES GENERALES

 

i.-Un porcentaje importante de los genes humanos presenta un alto grado de conservación evolutiva. La similitud entre el genoma humano y el del chimpancé (Pan troglodytes) es del 98.77 %. Los porcentajes de correspondencia encontrados en las secuencias masivas de ADN nuclear para Maria (con una media de 30,803% entre tres secuenciaciones masivas), Wawita ( 23.8%) y Victoria ( cuerpo tridactilo sin cabeza de 60 cm)(19.82%) están lejos de presentar un porcentaje similar a los primates.

 

Estos resultados están muy lejos del porcentaje de ADN que comparten especies tales como el perro, el gato, la llama con homo sapiens. Esto pone en tela de juicio afirmaciones que estas especies han sido fuentes de una supuesta manipulación de estos cuerpos tridactilos.

 

ii.- El esquema de trabajo seguido por el equipo del instituto Inkari al inicio, tomando muestras de un cerebro extraído de una cabeza suelta, se aleja del esquema de trabajo de Gaia-Tercer Milenio.

 

iii.-El hecho que exista una cabeza sin cuerpo, no permite afirmar científicamente que ella corresponda al cuerpo de Victoria sin cabeza. Segun su analisis de ADN mitocondrial practicado por Lakehead University Paleo-DNA ella corresponde 100%  con el ADN de homo sapiens. Victoria segun la secuenciacion masiva de ADN nuclear de BioTecmol corresponde 19,82% con homo sapiens y Abraxas en un trabajo mas fino de analisis bioinformatico encontro solamente 9% de correspondencia con Homo sapiens para Victoria. Como vemos estos resultados de secuenciacion masiva de ADN nuclear muestran que no se trata de la cabeza de Victoria.

 

iv.- Para continuar con la investigación en un futuro será necesario abordar profundamente las preguntas que no pudieron ser respondidas completamente como: Pertenecen los cuerpos desecados de Nazca y Palpa a dos nuevas especies diferentes? 

Existe una relación entre las posibles especies entre ellas a nivel genomico?

 

v.-Se debe insistir que en este caso no se esta tratando con momias clásicas provenientes de antiguas culturas preincaicas , se esta tratando con cuerpos desecados gracias a la acción de la tierra de diatomeas (situación sui generis dentro de la Paleo arqueología mundial).Este solo hecho amerita una investigación a parte entera por los profesionales de varios campos del conocimiento.

 

vi.-Ademas, al interior de los cuerpos se conservan aun restos de órganos como se pueden ver en los escáneres HD, de 128 cortes realizados en 2018, sobre los cuerpos desecados Maria, Wawita y Josefina, también hace parte de un caso interesante aunque no único en la arqueología. Pero por ejemplo en el caso de los pequenos tridactilos de 60 cm que se tiene varios especimenes, se podria proceder a un analisis interno con una exploracion de estos organos y ademas el posible analisis detallado de los huevos de el especimen josefina.

 

x.-La curiosidad analítica es el principal motor de la investigación científica y fue el cimiento de las realizaciones imperecederas que le dan la identidad única al Peru. Esperemos que este legado intemporal continue intacto en la mente y en la practica profesional de todos los grandes científicos del Peru. Porque creemos que esta curiosidad esta latente en cada uno de ellos, tenemos confianza que ella favorecerá a que las instituciones que los agrupan se interesen por este estudio.

 

xi.-La capacidad de colaboración e interacción con otros grupos de investigación, forman parte de las competencias de un científico en la era genomica. Por esta razón, esta investigación no pretende recoger méritos por el trabajo realizado. Solo quiere compartir este trabajo inicial, como apertura con otros científicos e instituciones oficiales y privadas pasando así el relevo a instituciones con mas experiencia y reconocimiento oficial.

 

xii.- En definitiva, la responsabilidad de validar o negar los resultados presentados les corresponde a los científicos peruanos basados en las mismas investigaciones científicas acordes a las realizadas hasta el día de hoy.

 

xiii.- Vivimos tiempos de reorganización global, a donde la universidad publica cada día tiene menos financiación estatal y las universidades e institutos privados de investigación viven un auge. Sin entrar en valoraciones que no son el objeto de este trabajo, no podemos cerrar los ojos ante esta realidad. No se puede argumentar que los estudios realizados por laboratorios privados no sean fiables, no es un buen argumento ya que los mismos estados a veces por falta de recursos estatales se ven obligados a recurrir para sus análisis a laboratorios privados de otros países. Este es el caso por ejemplo con el Peru que para sus análisis de datacion con Carbono 14 recurre a mas o menos 10 laboratorios privados en el mundo entre los que se encuentra Beta Analytic de USA, uno de los laboratorios que realizo la datacion de isótopos radioactivos del carbono 14 para los cuerpos desecados de Nazca y Palpa.

 

xiv.-Basada en los resultados del informe de la Ph.D Sarah Kouhou, y en los resultados de BioTecmol la presencia de secuencias no asignadas o no clasificadas en una muestra de tejido única excluiría, la hipótesis de que María podría estar formada por los restos de momias peruanas (homo sapiens), o establecido artificialmente /quirúrgicamente.

 

xv.-Aunque esta última hipótesis sería aún muy difícil de demostrar debido a que se requiere un altísimo nivel de biotecnología para manipular el ADN de estos cuerpos desecados y obtener asi los resultados coherentes encontrados a este particular en las cuatro secuenciaciones masivas realizadas por los laboratorios; BioTecmol (Mexico) y la organización federal de investigación, Instituto Medico Genético San Petersburgo, y Cen4GEN y Abraxas. Cabria decir que estos centros son especializados en genética molecular y su calidad de trabajo en la tecnología del ADN esta garantizada por las normas ISO.

 

xvi.-Nunca se ha perdido de vista que desde el inicio de esta investigación se ha tratado de responder con el método científico a preguntas básicas como la autenticidad de los cuerpos desecados, su eventual relación o similitud con homo sapiens y sus orígenes.

 

Hasta el presente, no se ha encontrado ninguna evidencia que sugiera que se trate de cuerpos cuerpo falsos o quirúrgicos.

 

xvii.- El siguiente seria un conjunto de pruebas: (a)La presencia de secuencias no Homo sapiens mayoritarias , bacterianas / contaminantes encontradas en las mismas muestras analizadas por los laboratorios por secuenciaciones masivas y comparables entre ellas . (b) El hecho de que no se encontró ADN animal (varias especies locales analizadas). (c) El hecho de que las secuencias modernas de ADN humano estaban presentes en un porcentaje menor. (d) La presencia de un bebé similar pequeño encontrado en el mismo sitio, con las mismas características atípicas sugiere que podríamos estar en presencia de especies biológicamente indefinidas, tal vez cerca de nuestra especie y que merece más investigaciones.

 

xviii.-Llegados a este punto, podríamos decir que se esbozan algunas posibles respuestas a preguntas como: Es un fraude este caso?

 

Hay evidencias provenientes de análisis científicos de diverso tipo que permiten inferir que no. Porque? Todos los análisis de ADN de diverso tipo y profundidad practicados hasta el día de hoy tanto a los cuerpos tridactilos desecados de 60 cm como a Maria y Wawita ratifican uno detrás de otro que se trata de entidades con un ADN que le es propio y ademas bien diferenciado con el ADN de homo sapiens.

 

La baja correspondencia del ADN de estas entidades con el ADN humano no superior a 30% en el mejor de los casos; permite explorar la posibilidad de encontrarnos frente a especies desconocidas y no clasificadas en el árbol filogenético de las especies.

 

Sin embargo, dos análisis de ADN mitocondrial de LAKEHEAD University-PALEO-DNA del Canada practicados a una cabeza suelta y a una grande mano tridactila arrojan resultados diferentes. Esta cabeza seria 100% homo sapiens y la mano gigante tendría una correspondencia con homo sapiens de 99% sin embargo en la secuenciacion del laboratorio Cen4GEN con analisis bioinformatico de Abraxas se encontro que esta mano grande tiene 97% de ADN similar a Homo sapiens. Esto dejaria claro que la grande es digna de explorar mas detalladamente

 

xix. Como explicar estos resultados? La cabeza suelta con apariencia semejante a las cabezas de los seres desecados de 60 cm completos que se encontraron, a simple vista no muestra las mismas características que las cabezas de los cuerpos completos. Esto plantea de antemano la problemática de no pertenecer a un cuerpo tridactilo desecado. Después de los primeros resultados del laboratorio a donde se encontró los resultados antes mencionados, y antes de volver a hacer el mismo análisis por el mismo laboratorio, lo ideal hubiese sido enviar muestras de uno los cuerpos tridactilos desecados Josefina, Alberto, Victoria o la familia al mismo laboratorio para poder comparar su análisis de ADN mitocondrial de uno de estos cuerpos completos con el análisis obtenido del tejido de esta cabeza.

 

xx.-Presentar una cierta similitud con las cabezas de los cuerpos completos tridactilos no esta basado mas que en una apariencia. Este es un criterio no objetivo. Para que se pueda afirmar que esta cabeza efectivamente proviene de un especimen tridactilo de 60 cm no se han realizado previamente a los análisis de ADN mitocondrial estudios científicos comparativos morfológicos, tomograficos o de ADN que permitan demostrar la correspondencia de ella con un cuerpo como el ser tridactilo desecado Victoria que no tiene cabeza o con los otros cuerpos completos de 60 cm.

 

xxi.-Debido a la falta de mutaciones de predicción de haplogrupos definitivas en ambas muestras y el abrumador daño en el ADN detectado en ambas muestras, un solo haplogrupo no se pudo predecir para ninguna de las muestras Cerebro craneal (1) HV2 o B2a Hueso de la mano (2) U8a, L3, S HV se originó hace 25,000 a 30,000 años en el cercano Oriente o el Cáucaso. Los miembros de este haplogrupo se movieron hacia el norte a través de las montañas del Cáucaso desde el Cercano Oriente y el Oeste a través de Anatolia. el haplogrupo B se encuentra en una frecuencia de alrededor del 17% en el sudeste asiático, y representa alrededor del 20% de toda China. Es uno de los cinco haplogrupos de ADNmt encontrados en los pueblos indígenas de las Américas. Como vemos, tampoco los análisis de ADN mitocondrial son concluyentes sobre el origen geográfico de esta muestra.

 

xxii.-En lo concerniente al análisis del cromosoma Y (que da el origen paterno), las dos muestras no tienen el mismo origen paterno ya que no comparten el mismo perfil. El tejido extraído de la cabeza suelta presenta el haplogrupo Q. De (Quetzalcoatl) surgió hace unos 15,000 a 20,000 años con un hombre nacido en Siberia. Sin embargo, no es moderno.

 

xxiii.-Llegados a este punto; Cabria preguntarse: Fueron armadas esta cabeza y esta mano por los antiguos Nazcas? Basado en sus resultados de ADN mitocondrial el instituto Inkari con esta cabeza suelta y con la grande mano podrían estar señalando que existen en este lote (mostrado por el presunto descubridor) piezas que fueron armadas por los antiguos habitantes de Nazca y Palpa y otras que son genuinas como lo muestra el mismo instituto Inkari con sus secuenciaciones de Maria en donde sus resultados solo tiene un ecart type (desviación ) de 4.98% entre los resultados de los tres análisis de secuenciacion masiva.

 

xxiv. Antes de finalizar; cabria decir que quedaría una gran duda, ya que el informe del laboratorio LAKEHEAD University-PALEO-ADN no garantiza que estos análisis sean auténticos, los cito textual: « Las muestras de comparación que se enviaron pueden contener un perfil de los arqueólogos o cualquier otro individuo que pueda haber manejado la muestra y potencialmente lo contaminó. Por lo tanto, no podemos garantizar que estos perfiles sean auténticos y no de un controlador anterior ».

 

xxv-La cabeza de donde se ha tomado tejido para los estudios, no es confiable para ser representativa de los cuerpos desecados tridactilos de 60 cm. Ella no ha sido el objeto de una verificación previa que ella provenga efectivamente de un ser tridactilo completo y validado con un análisis de ADN comparativo. En ningún caso, los resultados de ADN mitocondrial de esta cabeza suelta pueden desmentir la validez de la secuenciacion masiva de BioTecmol y la Universidad federal de San Petersburgo y Cen4GEN y Abraxas.

 

La ultima secuenciacion de  Victoria con solo una correspondencia de 15,25% con todas las especies existentes en la base NCBI arroja que Victoria ser tridactilo sin cabeza  se aleja aun mas de cualquier similitud con las especies actualmente conocidas.

 

xxvi.-Existen dos posibles especies diferentes? A nivel morfológico y de análisis radiológicos y tomograficos se observan grandes diferencias fenotipicas entre los dos tipos de cuerpos tridactilos desecados.De hecho, los especimes denominados, Josefina, Victoria y Albert poseen una talla de aproximadamente 60 cm y Maria tiene una talla de 1.68 cm. Poseen entre si, la característica de tener manos y pies tridactilos. Si bien, existen indices para explorar en la dirección de estar frente a dos especies diferentes, observando la diferencia de resultados arrojados para Maria y Wawita comparados con los resultados obtenidos para los cuerpos tridactilos de 60 cm. Faltan aun mas resultados y estudios filogeneticos para poder responder afirmativamente a esta pregunta. Ademas el hecho que wawita presente una tutilacion de dos dedos en pies y manos a pesar de tener un ADN diferente del humano deja un gran punto de interrogacion en esta investigacion.

 

xxi.-Los cuerpos desecados pertenecen a la especie humana? Según los resultados de ADN de huella autosomica profundizados con el estudio de ADN masivo, los cuerpos completos desecados no pertenecen a la especie humana. Responder a esta pregunta fue primordial. Esta investigación desde su inicio y por razones diversas que no son el objeto de este trabajo, ha suscitado perspicacias. En ocasiones para desvirtuar este caso, se ha llegado a afirmar que estos cuerpos fueron armados de momias preincaicas mutiladas para dar la apariencia que hoy presentan estos cuerpos.

 

Llegando a este punto, es importante poner los péndulos a cero, olvidar malos entendidos y en nombre de la ciencia y de un interés superior abrir un dialogo para que científicos y funcionarios del ministerio de cultura exploren en profundidad el caso en beneficio de la identidad cultural del Peru, país a donde se dio este hallazgo.

 

Serán los científicos peruanos que con sus estudios y análisis científicos los que oficialmente tengan la ultima palabra y verifiquen o infieran este trabajo. En caso de confirmarse los resultados, serán ellos los que publiquen los resultados de la investigación final en las revistas especializadas.

 

Se espera para poder avanzar, y llegando al punto a donde se encuentra la investigación que la comisión del congreso de la república del Peru tome en consideración el proyecto de ley presentado por el congresista Armando Villanueva de Cuzco. También es indispensable que se pueda entregar los cuerpos para su estudio a una universidad peruana preferencialmente a la Universidad de ICA por corresponder a esta zona el hallazgo y que se verifiquen o refuten los estudios realizados con nuevas muestras de los cuerpos desecados tridactilos de Nazca y Palpa.

 

Esta investigación podrá avanzar asi y encontrar el cause sereno que toda investigación científica requiere tomando asi el tiempo que le corresponda para poder abordar las muchas preguntas e interrogantes que aun están por resolver.

 

Clara Martinez

ONG SCRIT : http://ong-scrit.fr

Email: cm45631416@gmail.com

 

XI.- BIBLIOGRAFIA

 

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3 A. Hamosh, T. M. King, B. J. Rosenstein et M. Corey, « Cystic fibrosis patients bearing both the common missense mutation Gly-Asp at codon 551 and the delta F 508 mutation are clinically indistinguishable from delta F508 homozygotes, except for decreased risk of meconium ileus », American Journal of Human Genetics, vol. 51, 1er août 1992, p. 245–250 (ISSN 0002-9297, PMID 1379413, PMCID 1682672.

 

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11 Robert Belshaw, (2004). «Long-term reinfection of the human genome by endogenous retroviruses».. Proc Natl Acad Sci U S A. 6 de abril de 2004; 101(14): 4894–4899

SITIOS WEB

 

BLAST (http: blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) es la herramienta bioinformatica mas utilizada en todo el mundo. Ella permite la comparación de una secuencia problema(query sequence) de nucleotidos o de proteínas con todas las secuencias de una BD para encontrar regiones de similitud local. Ademas, calcula la significación estadística de los resultados.

 

http://bioinformatica.uab.es/base/base3.asp?sitio=ensayosgenetica&anar=pgh&item= Las normas de comparación se pueden consultar en: http://strbase.nist.gov/coreSTRs.htm http://www.nist.gov/**Core STR Loci utilizado en pruebas de identidad humana es la base de comparación de los alelos obtenidos.

 

http://www.futura-sciences.com/fr/doc/t/genetique/d/diversite-genetique-et-question-de-races_786/c3/221/p6/ [archive]

 

youtoube: clara martinez: CienciaConcienciaCritica :

TRABAJOS REALIZADOS Y PUBLICADOS POR INSTITUCIONES INTERNACIONALES

1.-Ciba-Geyge, centro Novartis Monthey-Suiza estudio piloto de análisis de aminas por los métodos de cromatografia de gas y espectrometria publicado y existente en la biblioteca de la empresa Ciba-Novartis.

2.-Revista Suiza de Cultivadores de Papa: Estudio de modificaciones del ADN y la virulencia de 12 cepas de Erwinia Carotovora. Centro nacional de investigaciones agrícolas Suizas CHANGINS Nyon-Suiza.

3.-Departamento de la Instrucción publica-DIP-Ginebra-Suiza trabajo titulado: Creación y Evaluación del curso de química del cotidiano. Curso publicado por la dirección general para todos los colegios de ginebra.

4.-Fabricación y Evaluacion de una nevera de alcohol. Por este trabajo la Suiza gano el primer premio europeo en Expociencias Europa-Francia St Jean de Monts. El trabajo se encuentra en la Biblioteca IFMES-Ginebra-Suiza;

5.-El instituto colombiano ICA y la Universidad de Narino publicaron mi tesis de grado en genetica: Evaluación de la selección masal estratificada para dos poblaciones de maíz (Zea maíz L.). Mi tesis de grado se encuentra en los archivos de tesis de la Universidad de Narino-Pasto-Colombia.

6.-COLCIENCIAS trabajo titulado: Extracción de caucho a partir del Euphorbia laticeifera ( Pinllo). Este trabajo fue el ganador de la selección en Colombia para representar a Colombia ante el congreso IberoAmericano de ciencias celebrado en el centro Charles Darwin en las Islas Galapagos, Ecuador y organizado por la SECAB y el convenio Andrés Bello. El trabajo se encuentra en los archivos del instituto Colombiano de Investigación científica. Colciencias.

7.-PNUD. ONU. Prevención del consumo de drogas en poblaciones adolescentes a riesgo por medio del desarrollo de actividades científicas en Colombia. Archivos PNUD.